兴义鸭MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D基因克隆与组织时空表达研究

发布时间：2017-04-01 08:04

  本文关键词：兴义鸭MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D基因克隆与组织时空表达研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本研究以0至150日龄兴义鸭为研究素材,利用RT-PCR结合A/T克隆的方法对肌细胞增强因子2家族(MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D)所有成员完整编码区(CDS)序列进行克隆,并对四个成员序列进行相关生物信息学分析,同时运用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)技术对兴义鸭该基因家族四个基因在不同生长阶段的心、肝、肺、肾、十二指肠、大脑、胸肌、腿肌、肌胃、腺胃10个组织的m RNA表达水平进行检测,试验主要研究成果如下:(1)成功克隆获得了兴义鸭MEF2A、MEF2B、MEF2C和MEF2D基因编码区序列,全长分别为1479 bp、1221 bp、1104 bp(1308 bp)和1548 bp的开放阅读框序列,分别编码492、406、367(435)和515个氨基酸,同时发现兴义鸭MEF2C基因可能存在两种剪切方式。(2)本研究首次克隆获得鸭MEF2B基因CDS区序列,该片段包含起始密码ATG和终止密码TAG,经序列比对与其他物种同源性较高。经NCBI在线预测m RNA保守结构域,结果显示其含有MADS-box保守结构域,不含HJURP_C区域,符合脊椎动物MEF2B结构特征。(3)兴义鸭MEF2基因家族实时荧光定量PCR检测发现,该基因家族所有成员的m RNA在0、30、60、90、120和150日龄鸭的10个组织中均有不同程度的表达,经统计分析,各基因的相对表达量在不同组织、不同阶段以及不同性别之间均存在显著差异。各基因在性别之间的表达差异都达到了显著水平,但同一生长阶段不同组织中公鸭和母鸭的表达趋势并不一致,同一组织不同生长阶段公鸭和母鸭的表达趋势并也不一致,这可能跟公母鸭的生长发育规律不同有关。各基因在同一生长阶段不同组织之间的表达差异都显著,同一组织不同生长阶段之间的表达差异也都达到显著水平,但各基因的表达趋势并不一致,表明四个基因的表达并不同步,这可能与四个基因各自的功能和表达顺序不同有关。
【关键词】：MEF2基因家族 克隆 组织表达 兴义鸭
【学位授予单位】：贵州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S834
【目录】：

• 主要符号说明表5-9
• 摘要9-10
• Abstract10-12
• 前言12
• 第一章 文献综述12-24
• 1.1 中国养鸭概况12-13
• 1.2 兴义鸭品种的概述13
• 1.3 肌肉发育机制13-15
• 1.4 MADS-BOX转录因子超基因家族15-16
• 1.5 MEF2因子家族研究概况16-22
• 1.5.1 MEF2A基因研究进展17-19
• 1.5.2 MEF2B基因研究进展19-20
• 1.5.3 MEF2C基因研究进展20-21
• 1.5.4 MEF2D基因研究进展21-22
• 1.6 本研究目的及意义22-24
• 第二章 材料与方法24-33
• 2.1 试验材料24-27
• 2.1.1 试验样品24
• 2.1.2 主要实验仪器24-25
• 2.1.3 主要试验试剂25
• 2.1.4 1‰DEPC处理水配制25-26
• 2.1.5 LB培养基配制26
• 2.1.6 感受态细胞培养（CaCl_2法）26-27
• 2.1.7 5×TBE的配制27
• 2.2 试验方法27-32
• 2.2.1 采样前准备27
• 2.2.2 总RNA提取27-28
• 2.2.3 组织总RNA检测28-29
• 2.2.4 cDNA第一条链合成29
• 2.2.5 引物设计及合成29-30
• 2.2.6 RT-PCR反应30
• 2.2.7 MEF2基因家族克隆30-31
• 2.2.8 实时荧光定量PCR(qPCR)31-32
• 2.3 数据分析与统计32-33
• 第三章 结果与分析33-83
• 3.1 总RNA提取检测33
• 3.2 RT-PCR扩增及CDNA克隆33-34
• 3.3 MEF2A基因克隆及序列分析34-36
• 3.3.1 MEF2A基因mRNA二级结构预测35
• 3.3.2 MEF2A蛋白质二级结构预测及理化性质35-36
• 3.3.3 MEF2A基因蛋白质三级结构预测36
• 3.4 MEF2B基因克隆及序列分析36-39
• 3.4.1 鸭MEF2B基因mRNA二级结构预测37-38
• 3.4.2 鸭MEF2B基因蛋白二级结构与三级结构预测38-39
• 3.5 MEF2C基因克隆及序列分析39-42
• 3.5.1 MEF2C基因mRNA二级结构及蛋白三级结构41-42
• 3.6 MEF2D基因克隆及序列分析42-43
• 3.7 实时荧光定量PCR43-83
• 3.7.1 MEF2家族及β-actin荧光定量PCR相关曲线43-44
• 3.7.2 兴义鸭MEF2在不同性别间的表达44-51
• 3.7.3 兴义鸭MEF2在不同组织间的表达51-66
• 3.7.4 兴义鸭MEF2基因发育性表达66-83
• 第四章 讨论83-90
• 4.1 兴义鸭MEF2A基因克隆及表达83-85
• 4.1.1 MEF2A基因多态性研究83-84
• 4.1.2 MEF2A基因克隆及组织表达84-85
• 4.2 兴义鸭MEF2B基因克隆及表达85-86
• 4.2.1 MEF2B基因克隆及多态性研究85-86
• 4.2.2 MEF2B基因表达研究86
• 4.3 MEF2C基因克隆及表达86-88
• 4.3.1 MEF2C基因克隆与多态性研究86-88
• 4.3.2 MEF2C基因表达研究88
• 4.4 MEF2D基因克隆及表达88-90
• 4.4.1 MEF2D基因克隆与多态性研究88-89
• 4.4.2 MEF2D基因表达研究89-90
• 第五章 结论90
• 下一步需要开展的工作90-91
• 参考文献91-95
• 致谢95-96
• 附录96-97

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