辽宁省猪链球菌流行株主要血清型毒力因子及其致病性差异研究

发布时间：2020-08-24 20:54

【摘要】：目的为明确辽宁省猪链球菌(Streptococcus suis,SS)流行菌株的主要血清型及其毒力因子分布特征、致病性强弱,探究与分析不同血清型的毒力因子、致病特征和病理类型相互之间的差异性与关联。一方面为探索猪链球菌致病机制提供理论基础,另一方面为建立相应的诊断方法、开发新型药物和疫苗、制定相应的防控措施提供依据。方法从辽宁地区17个规模化猪场送检的SS疑似病例肺脏、肝、脾、脑、关节液等样品中采集样本,统计流行发病特征,病理变化类型等;对收集到的样本应用分离纯化培养,形态学特征观察,生化实验等细菌学方法进行初步鉴定;依据猪链球菌属保守基因及血清型特异性基因,对分离到的菌株进行血清类型鉴定;对确诊的SS病例样本进行病理类型和血清型的统计分析,分析不同病理类型和血清型之间的关联,从而确定SS不同病理类型的优势血清型。应用毒力因子特异性基因对所分离鉴定的不同血清型SS进行主要毒力因子检测,比较分析猪链球菌不同血清型主要毒力因子的分布和差异性。应用小鼠攻毒试验和病理学技术对不同血清型SS的致病性进行观察,比较分析不同血清型致病性的差异性。结果1、查明了辽宁地区猪链球菌病的主要病型和血清型及其变化趋势,辽宁省SS流行菌株主要血清型为1、2、7型,与其它地区有所差异;此外,在不同时期,流行的血清型也存在一定差异,如2015年检出为1、2、7型,2016年主要为2型和7型,2017年为1型和7型。2017年以来辽宁省SS发生率和死亡率明显减轻,可能与其血清类型变化有关。2、对SS的病理类型与血清型关系进行统计分析,结果显示:急性败血型与关节炎型病例优势血清型为SS2,脑膜炎型病例优势血清型为SS1,化脓性淋巴结炎(淋巴结脓肿)型等轻度感染病例优势血清型为SS7。3、不同血清型毒力因子检测分析结果表明,SS2均具备5-6种毒力因子,SS1、SS7和血清型阴性株只具有部分毒力因子,再一次证明SS2的致病力远远大于其他血清型,与其毒力因子分布有关。此外辽宁省与其它地区的SS2毒力因子表型存在差异,SS2与其它血清型的主要差异毒力因子是epf,表明epf是猪链球菌的重要毒力因子。4、对三种辽宁流行的SS主要血清型(1、2、7型)菌株进行小鼠致病性试验结果表明:SS2引起小鼠全部死亡,表现为急性败血症以及严重脑膜炎,SS1、SS7引起部分小鼠死亡,各器官损伤和脑膜炎反应较轻,但SS1比SS7的死亡率高,病变程度也严重,说明SS2的致病力最强,SS1次之,SS7最轻。不同血清型对各器官的损伤有显著差异,SS2比SS1、SS7对各脏器损伤都很显著;SS1对脑组织损伤显著,SS7对肝脾损伤较大。脑内接种实验结果证明脑膜炎反应程度明显高于腹腔接种。结论1、辽宁省猪链球菌流行菌株主要血清型为1、2、7型,与其它地区有所差异;SS2均具备5-6种毒力因子,SS1、SS7和血清型阴性株猪链球菌只具有部分毒力因子,证明不同血清型猪链球菌的毒力因子分布有较大差异。2、猪链球菌不同病理类型的优势血清型不同,急性败血型与关节炎型、脑膜炎型、化脓性淋巴结炎猪链球菌的优势血清型分别为SS2、SS1和SS7。3、SS2的致病力最强,SS1次之,SS7最轻,确证了猪链球菌不同血清型的致病力有较大差异。不同血清型对感染动物器官的损伤有选择差异性,说明猪链球菌血清型与临床表现多种病理类型具有关联性。
【学位授予单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：S852.611
【图文】：

猪链球菌,辽宁省,中性粒细胞,支气管

图 1 辽宁省猪链球菌流行发病特征剖检变化观察2、病理组织学变化特征观察（1）急性败血型：① 肺脏：支气管黏膜坏死脱落，支气管腔内有大量炎性细胞渗出，有脱落的黏膜上皮细胞，中性粒细胞，支气管周围粉红色有浆液和单核细胞；肺脏组织紊乱，肺泡壁崩解坏死，肺泡壁间隔有多量中性粒细胞，淤血。肺组织呈现大量中性粒细胞聚集的化脓性炎症特征，有的肺组织有网状纤维素性渗出物（图2-A HE 200×）。② 脾脏：脾脏表现变质性出血性炎，脾小体淋巴细胞、网状细胞坏死崩解，大量中性粒细胞、出血；脾窦坏死崩解，中央静脉管壁坏死、溶解（图 2-B HE

组织病理变化,猪链球菌,辽宁省,化脓性淋巴结炎

少部分神经元变性坏死；脑组织水肿；脑实质内血管周围间隙内有多量中性粒白细胞渗出（图2-F、G HE 100×）。（3）关节炎型：为浆液性或化脓性炎症。（4）化脓性淋巴结炎（淋巴结脓肿）型：淋巴结表现变质性出血性炎，淋巴细胞、网状细胞变性坏死，数量下降，中性粒细胞和红细胞渗出（图 2-H HE100×）。图 2 辽宁省猪链球菌流行发病特征组织病理变化观察

猪链球菌,生长状态,流行株,形态结构

呈α溶血或β溶血（见图3-B）；经革兰氏染色后，光学显微镜下可观察到革兰阳性球菌，单个、成对或呈 3~6 个球的短链存在，少量可被染成革兰阴性（见图 3-C）。图 3 猪链球菌流行株的生长状态与形态结构注：A 为在 THB 固体培养基上的生长状态，B 为在绵羊血平板上的生长状态，C 为革兰染色镜下形态结构

【参考文献】