SPF金定鸭种群质量控制及应用研究

发布时间：2020-09-04 08:20

　　 培育有重大价值的农用实验动物,是丰富实验动物新资源的重要内容。我国是全国最大的鸭生产国,疾病对养殖业危害严重。标准化的无特定病原体鸭是农业领域科学研究和多种生物制品研发、生产与检定等环节重要的实验动物和原材料。本研究以培育中的F1代金定鸭(A、B、C、D 4个家系)为基础,开展培育研究。种群培育采用鸭用隔离器饲养、高效滤过空气、钴60辐照饲料、饮用酸化水、严格控制人流物流等方式阻断外界环境污染和再感染途径。目前,种群已培育到F3代。整体鸭群共有鸭461只,产蛋母鸭388只。该种群命名为HJD-SPF鸭。本研究对种群主要开展了微生物学、遗传学和饲料营养学检测3方面的研究。微生物学方面,通过定期全群普查检测病原微生物携带情况,淘汰阳性个体,在鸭群中净化了I型鸭肝炎病毒、鸭瘟病毒、鸭圆环病毒、鸭坦布苏病毒、鹅细小病毒、禽白血病病毒、禽呼肠孤病毒、禽流感病毒(H5亚型(Re8株)、H7亚型、H9亚型)、新城疫病毒、禽腺病毒III型等共10种病原。遗传学方面,利用17对微卫星标记对该群体的遗传多样性进行了评估,结果发现,该群体中有13个位点呈高度多态(PIC0.5),平均杂合度为0.5816±0.0142,12个位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡(P0.01),符合封闭群培育和选育的遗传学特点。另外,发现SPF金定鸭对DHV-I和DPV强毒株易感;并发现SPF金定鸭鸭胚对DHV-I和DPV敏感,测得ELD_(50)和TCID_(50)分别为10~(-4.6)和10~(-4.8);采用组织消化培养法从SPF金定鸭鸭胚脐带中分离得到鸭胚脐来源的干细胞,建立鸭胚脐带来源的干细胞系。将DPV(CSC株)接种到鸭胚脐带来源的干细胞上,并对其进行传代培养。通过病变观察、PCR检测、IFA检测、细胞切片中病毒粒子电镜观察等分析DPV在鸭胚脐带来源的干细胞上的增殖特性。结果显示,DPV(CSC株)首次接种于鸭胚脐带来源的干细胞上,即产生了病变,随着在鸭胚脐带来源的干细胞上连续传代,病变能够稳定存在。鸭胚脐带来源的干细胞上增殖的DPV的F1-F35均扩增出大小为416 bp的UL6基因片段。间接免疫荧光检测进一步证实了兔抗DPV的阳性血清能够对染毒的细胞产生特异性免疫荧光。细胞切片的电镜观察能够看见细胞间隙和细胞囊泡内以及细胞质中均可观察到装配完整和装配不完整的病毒粒子。以上结果表明DPV能够在鸭胚脐带来源的干细胞上增殖。综上,我们初步建立了无特定病原体、遗传学背景清晰、疫病敏感的标准化SPF金定鸭鸭群,并建立了能够用于DPV增殖的鸭胚脐带来源的干细胞系。
【学位单位】：东北农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S834
【部分图文】：

群繁育以本实验室培育中的 F1 代金定鸭（A、B、C、D 4 个家系）为基础，开培育流程见图 3-1。培育的雏鸭自 1 日龄起即饲养在隔离器中。每只鸭标踪监测。种群采用高效滤过空气、钴 60 辐照饲料、饮用酸化水、严格控阻断外界环境污染和再感染途径。采用随机交配法，繁育子代。F1 代饲，选留受精卵，繁育 F2 代。每隔 1 年繁育 Fn+1 代。繁育 Fn 代时，根据 3 倍终数量的 Fn 代雏鸭（即每个家系雄鸭（♂）10 只，雌鸭（♀）36 只）终保种鸭。每个家系，每个隔离器保种情况见表 3-1。

果与分析PF 金定鸭种群规模研究以本实验室培育中的 F1 代金定鸭为基础，开展培育研究。每一年传代一个世代经过连续多次的种群微生物学筛查后，留取最终保种鸭。每个世代每个家系保于至少 2 台隔离器中见图 4-1。SPF 金定鸭种群保种情况见表 4-1。另外，选育过一部分经微生物学筛查合格的鸭转移至屏障环境饲养，作为生产群。目前，SPF 金B、C、D 4 个家系保种群共有 193 只，产蛋母鸭 144 只；屏障环境中共有鸭 268 鸭 244 只。F3 代繁育中，整体鸭群共有鸭 461 只，产蛋母鸭 388 只。该种群命名F 鸭。

结果见表 4-3。F1 代第三次 PCR 检测结果图见附录 A，前该种群已排除 10 种病原，该种群经过初步净化，已达到 SPF 级表 4-2 SPF 金定鸭种群微生物学检测情况Tab.4-2 Microbiological detection of SPF Jinding ducks population Time (year/month) Weeks Detection of 15/10 4716/01 1616/03 2416/06 3616/09 4817/04 7217/09 9217/01 4417/04 1617/09 3618/01 5218/01 8 1

【参考文献】

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本文编号：2812088