基因Ⅶh亚型NDV人工感染SPF鸡后的病理组织学、病毒分布及TLR3和IRF7表达的动态变化

发布时间：2020-09-08 20:41

　　新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)是危害养禽业的重要病原之一。近年来,新基因亚型ⅦhNDV已在东南亚及南非等地区鸡群广泛流行。为了探讨基因Ⅶh亚型NDVGXC110083株感染鸡的致病机理和TLR3、IRF7在NDV感染过程中的作用,本研究分别用NDV GXC110083毒株和中国标准强毒株F48E8感染42日龄的SPF鸡,观察感染鸡临床发病情况,并于感染后(days post inoculation,DPI)1、2、4天分别采集各组鸡的脾脏、胸腺、法氏囊、肾脏、胰腺、十二指肠等组织器官,运用组织病理学、免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)和图像分析等技术来观察各组织器官中NDV病毒抗原、TLR3、IRF7的分布及其动态变化。具体结果如下:(1)NDV感染鸡后各组织器官的病理学变化GXC110083与F48E8毒株感染鸡后均能够在2d内引起鸡明显发病并在4d内出现快速死亡,表现典型的临床症状和剖检病变。病理组织学观察发现,GXC110083和F48E8毒株感染组鸡的脾脏、胸腺、法氏囊、肾脏、胰腺、十二指肠等组织器官均呈现较严重的病理组织学损伤。感染后第1天,GXC110083攻毒组的脾脏、胸腺、法氏囊、肾脏、十二指肠均出现不同程度病变,表现为免疫器官组织中淋巴细胞减少、肾小管上皮细胞变性并有少量坏死及肠黏膜上皮细胞坏死脱落,随着病程的发展,各组织损伤越来越严重,第4DPI时损伤最为严重,所有组织均出现不同程度的坏死,法氏囊淋巴滤泡严重萎缩,且脾脏、胸腺、十二指肠组织的坏死灶内有大量炎性渗出物。而F48E8攻毒组各组织的损伤也很严重,且与GXC110083攻毒组相比,F48E8攻毒组的脾脏、胰腺、法氏囊的损伤更严重些。(2)NDV感染鸡后的病毒的分布及其动态变化IHC结果显示,GXC110083和F48E8感染组均可在1DPI分别从脾脏、胸腺、法氏囊、肾脏、胰腺、十二指肠中检测到病毒抗原,主要出现在淋巴细胞、网状细胞以及各类上皮细胞的胞浆中。GXC110083感染组在感染初期1DPI时在十二指肠、法氏囊、肾脏中的病毒含量最多,在胰腺中的病毒含量最少。在2DPI时,肾脏、法氏囊组织中的病毒含量呈下降趋势,其他组织均呈显著的上升趋势,与感染1DPI相比差异显著(P0.01)。感染4DPI时,肾脏组织中病毒含量明显上升,其他组织中的病毒含量均下降。F48E8感染组在感染初期1DPI时在十二指肠、脾脏、肾脏中的病毒含量最多,胰腺中的病毒含量最少,在感染2DPI时在脾脏中的病毒含量呈明显的上升趋势,在法氏囊、胸腺、胰腺中的病毒含量变化不明显,肾脏、十二指肠中的病毒含量则明显下降,感染4DPI时法氏囊、肾脏、十二指肠中的病毒含量显著升高,胸腺、脾脏、胰腺中的病毒含量则明显下降。(3)NDV感染SPF鸡后各组织中TLR3表达的动态变化IHC检测结果显示,TLR3在脾脏、胸腺、法氏囊、肾脏、胰腺、十二指肠中均有表达。在感染后第1、2、4天,GXC110083攻毒组脾脏和肾脏中的TLR3表达量均上调,F48E8攻毒组脾脏、胸腺、法氏囊、肾脏中TLR3的表达量均上调,与对照组相比均差异极显著(P0.01)。GXC110083攻毒组在感染后第2、4天胸腺中的TLR3表达量均上调,在感染后第1、4天法氏囊中TLR3表达量均上调,在感染后1、2天胰腺、十二指肠中TLR3表达量均上调,与对照组相比差异极显著(P0.01)。F48E8攻毒组感染后第2、4天胰腺中的TLR3表达量上调,在感染后第1天十二指肠中的TLR3表达量上调,与对照组相比差异极显著(P0.01)。(4)NDV感染SPF鸡后各组织中IRF7表达的动态变化IHC检测结果显示,IRF7在脾脏、胸腺、法氏囊、肾脏、胰腺、十二指肠中均有表达。在感染后1、2、4天,GXC110083攻毒组胸腺、法氏囊、肾脏、胰腺、十二指肠中IRF7的表达量均上调,F48E8攻毒组脾脏、胸腺、法氏囊、胰腺、十二指肠中IRF7的表达量均上调,与对照组相比差异极显著(P0.01)。在感染后第1、2天GXC110083攻毒组脾脏中IRF7的表达量均上调,在感染后2、4天F48E8攻毒组肾脏中IRF7的表达量均上调,与对照组相比差异极显著(P0.01)。因此,本研究结果表明,基因Ⅶh亚型NDVGXCI10083和F48E8毒株均能够对SPF鸡的内脏器官造成严重损伤,GXC110083毒株与F48E8毒株感染鸡后能够在1DPI广泛分布于脾脏、胸腺、法氏囊、肾脏、胰腺、十二指肠等器官中,并迅速增殖从而对组织器官造成损伤,两攻毒组各个组织器官中TLR3和IRF7蛋白的表达水平均有显著上调,表明TLR3和IRF7参与了 SPF鸡抵抗GXC110083和F48E8新城疫病毒感染的过程。
【学位单位】：广西大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S858.31
【部分图文】：

信号通路,激酶,机制,磷酸

作用于ＴＲＩＦ［４７］。ＴＩＲＦ依赖途径激活ＴＢＫ１和ＩＫＫｘ两种激酶来对ＩＲＦ３／ＩＲＦ７磷酸逡逑’逦化，从而诱导Ｉ型ＩＦＮ的表达。ＴＬＲ信号通路见图１－１。逡逑５逡逑

感染鸡,毒株,下眼睑,腺胃

眼睑、胸腺等均出血严重，而脾脏肿大有弥漫性白色针尖状坏死点；在感染后第逡逑４ｄ腺胃乳头、十二指肠出血严重，肾脏肿大并有尿酸盐沉积呈花纹状，下眼睑肿逡逑大出血，胰腺萎缩坏死，脾脏肿大坏死（如图２－１）。Ｆ４８Ｅ８攻毒组在感染后第逡逑Ｉｄ出现了十二指肠、盲肠扁桃体及眼睑出血，胰腺有弥漫性白色坏死点；在感染逡逑后第２ｄ腺胃乳头出血，下眼睑内膜肿大出血，脾脏和胰腺均具有弥漫性白色坏逡逑死点，胸腺及十二指肠严重出血，气管有粘液；在感染后第４ｄ胰腺严重萎缩坏逡逑死，胸腺及法氏囊明显萎缩，腺胃出血，盲肠扁桃体及下眼睑出血，肾脏肿大并逡逑有尿酸盐沉积。逡逑｜Ｐ逡逑魏~|逡逑图２－１邋ＧＸＣ１１００８３毒株感染鸡后主要剖检病变逡逑Ｆｉｇ邋２－１邋Ｔｈｅ邋ｍａｉｎ邋ｇｒｏｓｓ邋ｆｉｎｄｉｎｇｓ邋ｏｆ邋ｃｈｉｃｋｅｎ邋ｉｎｆｅｃｔｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ＧＸＣ１１００８３邋ｓｔｒａｉｎ逡逑１７逡逑

含量变化图,病毒抗原,脾脏,病毒感染

采用病理图文系统和Ｉｍａｇｅ邋ｐｒｏ邋ｐｌｕｓ３２软件分析统计得出ＧＸＣ１１００８３和逡逑Ｆ４８Ｅ８毒株感染鸡后的第１、２、４天病毒抗原在脾脏中的含量变化，病毒含量用逡逑平均光密度值表示。如图２－９结果显示，在感染后的ｌ－２ｄ，Ｆ４８Ｅ８攻毒组的脾脏逡逑中病毒抗原量均显著高于ＧＸＣ１１００８３攻毒组（Ｐ＜０．０１）。两攻毒组病毒抗原在逡逑脾脏中的总体变化趋势均呈先升高后降低趋势，第２ｄ达到峰值。逡逑0．０６ｉ逦＊＊邋？逡逑Ｉ逦媝珍＾灥１却ｉ逡逑＿逦＿邋．曰邋４：逡逑Ｉ逦｜１逡逑—．＿■＿■醒量逡逑ＧＸＣ１１００８３逦Ｆ４８Ｅ８逡逑图２－９邋ＮＤＶ病毒感染鸡后病毒抗原在脾脏中的含量变化逡逑注：＊表示该攻毒组与另一攻毒组差异显著（Ｐ＜０．０５）邋，邋＊＊表示该攻毒组与另一攻毒组差异逡逑极显著（Ｐ＜０．０１）逡逑Ｆｉｇ邋２－９邋Ｃｈａｎｇｅ邋ｏｆ邋ｖｉｒｕｓ邋ａｎｔｉｇｅｎ邋ｃｏｎｔｅｎｔ邋ｉｎ邋ｓｐｌｅｅｎ邋ｏｆ邋ｃｈｉｃｋｅｎ邋ｉｎｆｅｃｔｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ＮＤＶ邋ｓｔｒａｉｎｓ邋Ｎｏｔｅ：邋＊逡逑ｉｎｄｉｃａｔｅｄ邋ｔｈｅ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ邋ｂｅｔｗｅｅｎ邋ＧＸＣ１１００８３－ｉｎｆｅｃｔｅｄ邋ａｎｄ邋Ｆ４８Ｅ８－ｉｎｆｅｃｔｅｄ邋ｉｓ邋ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ邋（Ｐ＜０．０５），逡逑＊＊邋ｉｎｄｉｃａｔｅｓ邋ｂｅｔｗｅｅｎ邋ＧＸＣ１１００８３－ｉｎｆｅｃｔｅｄ邋ａｎｄ邋Ｆ４８Ｅ８－ｉｎｆｅｃｔｅｄ邋ｔｈｅ邋ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ邋ｉｓ邋ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ邋ｈｉｇｈｌｙ逡逑（Ｐ＜０．０１）．逡逑２．３．４．２邋胸腺逡逑病毒抗原主要位于胸腺髓质区的网状细胞和淋巴细胞上。１ＤＰ１

【参考文献】