水貂腹泻病的流行病学调查和主要病原分子生物学特点分析

发布时间：2020-09-30 19:56

　　 水貂腹泻病是严重危害我国水貂养殖业的重大疫病,死亡率高、经济损失大,病因复杂、缺乏有效的防控技术,本研究旨在明确水调腹泻的主要传染性病原,提升水貂养殖场的腹泻病防控能力。采用描述流行病学调查和实验流行病学调查方法,揭示水貂腹泻病的存在现状和腹泻病在水貂养殖场的三间分布情况,结合宏基因组测序技术对腹泻样品的肠道黏膜进行了病毒核酸和细菌16SDNA序列测定,明确水貂腹泻的主要病原,对存在的主要病原犬瘟热病毒(Caninedistempervirus,CDV)、伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪圆环病毒2型(Porcinecircovirus2,PCV2)和发热伴血小板减少综合症病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)进行了分子生物学特点分析和流行病学调查,建立主要病原的诊断检测方法,研制防制制品,为建立水貂腹泻主要病原的生物安全防控技术体系提供技术支撑。结果表明:1.山东省水貂腹泻病发病区域主要集中在威海、青岛、潍坊、临沂等地市,发病时间主要集中在6-9月份,以夏秋季多发,占全年发病总数的90%以上,即发病期集中在水貂断奶期至育成前期,冬毛成熟期貂和围产期种貂发病率较低。2.对主要病原进行了检出率统计,CDV为15.78%、水貂肠炎病毒(Mink enteritis virus,MEV)为 7.97%、星状病毒(Astrovirus,AST)为 9.33%、PCV2 为3.85%和PRV为6.87%,大肠杆菌45.34%,链球菌属34.67%,葡萄球菌属24.19%,肺炎克雷伯氏菌20.19%,绿脓杆菌4.99%,其他细菌占8.39%。同时存在CDV与其他病毒的混合感染,其中CDV与MEV的混合感染率2.9%,与PCV2混合感染率为1.79%、与AST的混合感染率为1.82%,与PRV的混合感染率为1.1%。且病毒的检出率存在明显的地区差异。水貂存在新型布尼亚病毒的感染。3.宏基因组检测发病水貂和健康水貂发现水貂常见的CDV和阿留申病毒,患病水貂还带有水貂冠状病毒、猫传染性腹膜炎病毒、疱疹病毒、呼肠孤病毒等。发病水貂和健康水貂共有菌属198种,其中有12种菌属是常见的致病菌属,气单胞菌属(Aeromonas)、假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、柠檬酸杆菌(Citrobacter)、链球菌(Streptococcus)、志贺氏菌(Shigella)、葡萄球菌(Staphylococcus)、克雷伯氏菌(klebsiella)、埃希氏菌(E.coli)、坂崎肠杆菌(Bntorobater sakazakii)、不动杆菌属(Acinetobacter)、气球菌属(Aerococcus)、变形杆菌属(Proteus)。4.在喂食伪狂犬病死猪的水貂场水貂发病率为87%,病死率100%。分离获得两株PRV W-MPRV1和W-MPRV2,W-MPRV1在gD基因的3末端具有282bp的缺失。感染水貂的PRV分离毒株是PRV的一个毒株。且与对Bartha-K61疫苗有抗性的猪的PRV毒株在系统发育上密切相关,提示疫苗抗性PRV早已在中国广泛传播。5.在腹泻水貂死亡病例中分离到两株PCV2,分别是MiSD-1和MiSD-2,MiSD-1 属于 PCV2b-1 B 组,MiSD-2 属于 PCV2b-1C 组。6.建立并标准化了荧光PCR方法检测10病毒和7种细菌,包括水貂犬瘟热病毒、细小病毒、冠状病毒、轮状病毒、星状病毒、阿留申病毒、杯状病毒、博卡病毒、圆环病毒、伪狂犬病毒,大肠杆菌、绿脓杆菌、克雷伯氏菌、嗜水气单胞菌、沙门氏菌、柠檬酸杆菌、不动杆菌;建立了特异和敏感的双重RT-PCR方法检测犬瘟热病毒与犬副流感病毒,其灵敏度(分别为1.2110-3ng/μL和1.5110-3ng/μL)远远高于目前的检测方法(约为1ng/μL);研制了大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌的三重荧光定量PCR检测方法,其灵敏度、重复性及特异性均较好,可用于同时快速检测三种病原菌。7.研发了防治水貂消化道疾病的中药制剂,分别是“一种治疗水貂消化道疾病的药物”、“一种治疗水貂大肠杆菌型消化道疾病的药物”和“一种治疗奇异变形杆菌型消化道疾病的药物”。结论1.水貂腹泻病主要发生在断奶期至育成前期水貂,即每年的6-9月份,发病区域与养殖数量相关,养殖数量集中的地区发病率高。生物安全意识淡薄,饲养管理水平相对滞后,是诱发各种疫病主要原因。2.通过流行病学调查、宏基因组的测定和相关主要病原的分子生物学研究,分析发现水貂腹泻的主要病原是犬瘟热病毒,在犬瘟热病毒存在的情况下,水貂会继发或混合感染其他病毒和细菌,如细小病毒性肠炎,大肠杆菌等。同时,存在其他病原如圆环病毒、伪狂犬病毒和SFTSV等的感染,甚至导致疫情的暴发流行。3.建立了水貂主要病原的诊断检测方方法,并标准化,研制了防制制品,初步建立了水貂腹泻病综合防控技术体系,并取得良好的推广应用效果。
【学位单位】：山东大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S858.92
【部分图文】：

１．１水貂规模化养殖主产区分布逡逑对收集的１７０份调查问卷进行了统计分析。其中１０个地市为规模化养殖的逡逑主产区，见图１－１，分别是青岛、潍坊、威海、烟台、临巧、日照、聊城、济逡逑宁、荷泽和滨州。逡逑注：蓝色标注是水貂主产区逡逑图水貂主产区分布图逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１－１邋Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ邋ｍａｐ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｍａｉｎ邋ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ邋ａｒｅａｓ邋ｏｆ邋ｍｉｎｋ逡逑１．邋２水貂常见多发症存在情况逡逑规模化水貂养殖场中常见多发症，见图＾２，主要表现为肺炎、腹泻和神经逡逑症状。其中肺炎占６３％，神经症状占１３％，腹泻症状占２４％。逡逑２４逡逑

图１－４邋２０Ｕ－２０１６年不同月你送检疫病情况逡逑Ｆｉｇｕｒｅｌ－４邋Ｔｈｅ邋ｎｕｍｂｅｒ邋ｏｆ邋ｓａｍｐｌｅｓ邋ｒｅｃｅｉｖｅｄ邋ｅａｃｈ邋ｍｏｎ化邋ｆｒｏｍ邋２０１１邋化邋２０１６逡逑

貂疾病的诊断和治疗带来了一定困难。逡逑２．邋５．１各种细菌感染情况逡逑对１３，８５９份送检病死水貂病料进行了细菌的检测，结果见表１－５和图１－逡逑８。统计表明细菌１＾＞１大肠杆菌、链球菌、葡萄球菌、绿肢杆菌和肺炎克雷伯氏菌逡逑感染为主。逡逑表１－５水貂细菌感染情况统计逡逑Ｔａｂｌｅｌ－５邋Ｂａｄｅｒｉａｌ邋ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ邋ｒａ（：ｅｓ邋ｏｆ邋ｍｉｎｋｓ逡逑细菌种类逦感染数量（共１３８日９例）逦感染率（％）逦逡逑大肪杆菌逦６，２８２逦４５．３４逡逑链球菌属逦４，８０５逦３４．６７逡逑葡萄球菌属逦３，邋：３５２逦２４．巧逡逑肺炎克雷伯氏菌逦２，７９８逦２０．１９逡逑绿胳杆菌逦６９１逦４．卵逡逑其他逦１，１６３逦８．３９逡逑

本文编号：2831309