SR-B1基因在大鼠卵巢和子宫中的表达及调节

发布时间：2020-10-08 22:47

　　 SR-B1作为高密度脂蛋白的生理性受体,参与高密度脂蛋白—胆固醇酯的选择性吸收和类固醇激素的生成。尽管SR-B1在肝脏、肾上腺和卵巢等的功能已有很多研究,但其在大鼠发情周期的卵巢和子宫的表达研究较少。本论文应用IHC、real-time PCR和western blot等方法,在分析大鼠正常发情周期的卵巢和子宫SR-B1表达的基础上,检测了外源类固醇激素处理对其表达的影响,为研究SR-B1在卵巢卵泡发育、黄体发育和子宫功能等方面发挥作用提供试验依据。此外,我们利用亚砷酸钠构建大鼠特异性卵巢氧化应激模型,对SR-B1及类固醇激素合成关键基因StAR、P450scc和3β-HSD的表达进行检测,对进一步了解SR-BI和StAR等基因参与机体内类固醇激素生成,解释亚砷酸钠干扰卵巢的正常生殖生理的机制具有一定的科学价值。主要内容如下:1 SR-B1在大鼠发情周期卵巢和子宫中的定位与表达为了研究SR-B1在大鼠发情周期卵巢和子宫中的定位与表达,通过阴道涂片法确定发情周期,real-time PCR结果显示卵巢SR-B1 mRNA在大鼠发情前期至发情后期的表达水平持续升高,而在间情期的表达显著降低(P0.05);且western blotting结果显示其表达模式与mRNA的相似。子宫SR-B1的mRNA和蛋白的表达模式也一致:在发情前期表达水平显著高于其他时期(P0.05)。免疫组化结果发现SR-B1蛋白主要定位于各级卵泡的卵母细胞和膜细胞质中,在间质和黄体中也存在表达。在发情周期任何阶段的黄体上表达很强,但不在颗粒细胞中表达。SR-B1主要定位在细胞质和质膜中,而不是在细胞核上。在子宫中,SR-B1蛋白主要定位于子宫内膜腔上皮和腺上皮细胞质,在平滑肌细胞质上也有强表达,而在间质细胞上几乎无表达。由上述结果可知,SR-B1在大鼠发情周期卵巢和子宫上表达,可能参与卵泡发育、黄体功能和子宫功能的调节。2外源性类固醇激素对大鼠卵巢和子宫SR-B1表达的影响为了研究卵巢和子宫SR-B1在大鼠发情周期中的调控机制,利用17β-雌二醇(E_2)、孕酮(P_4)、或其抑制剂处理未性成熟大鼠,连续注射三天(从出生后第24天至26天)。结果发现类固醇激素可促进大鼠卵巢和子宫的增重。Real-time PCR和western blotting结果均表明,经过E2处理后,大鼠卵巢和子宫的SR-B1表达水平均显著高于其它处理组(P0.05)。而P4单独处理的效果不明显(P0.05),E2和P4协同处理却能够显著促进卵巢和子宫SR-B1的表达(P0.05);采用雌激素受体拮抗剂(ICI 182780)预处理,显著降低雌激素诱导的SR-B1的表达水平(P0.05),而孕激素受体拮抗剂(RU486)则对SR-B1表达没有显著影响(P0.05)。上述结果证实,雌激素可显著促进SR-B1在早期大鼠卵巢和子宫的表达,且雌激素受体参与了雌激素介导的SR-B1表达调控。3大鼠卵巢氧化应激模型构建及类固醇激素合成相关基因的表达机体内SR-B1和StAR等基因在类固醇激素的合成过程中发挥重要作用。为了进一步检测SR-B1和StAR等类固醇激素合成相关基因在大鼠卵巢氧化应激状态下的表达情况,利用亚砷酸钠构建大鼠卵巢氧化应激模型,并对其进行评估和检测。20只成年大鼠平均随机分为对照组和处理组,分别隔日腹腔注射生理盐水和亚砷酸钠溶液。通过HE检测卵巢的组织形态学,放射免疫测定血清性激素水平,生化比色法测定组织氧化标记物来评价氧化应激模型。利用real-time PCR方法检测卵巢SR-B1、StAR、P450scc和3β-HSD基因的表达水平。结果发现:与对照组相比,处理组卵巢的组织结构破坏,卵泡大量闭锁;雌激素和孕激素水平显著降低;氧化标记物中的活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)含量显著升高,但谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)和超氧化物歧化酶(SOD)活性均显著降低;定量PCR结果表明处理组的4个基因表达水平显著降低(P0.05)。本试验证实了这些类固醇激素合成关键基因在大鼠卵巢氧化应激时的表达受到干扰和破坏,这为解释亚砷酸钠干扰哺乳动物卵巢的正常生殖生理机制提供理论依据。
【学位单位】：南京农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：S814
【部分图文】：

ｎ－ａｎａｌｏｇｏｕｓ－ｌ，（ＸＡ－ｌ）序列间具有８１％的同源性１＂１。逡逑作为一种细胞表面糖蛋白，ＳＲ－Ｂ１的相对分子质量为８２Ｘ１０３，含有５０９个氨逡逑基酸残基，在ＳＤＳ凝胶电泳上的分子量大小为８２？８５邋ｋＤａ邋（图１－１）；其二级结构逡逑包括两个胞浆域、两个跨膜域和一个胞外域。蛋白结构形如马蹄样，其中环状胞外逡逑域较长，由４０３个氨基酸残基构成，该结构域有１０个Ｎ连接的糖基化位点，富含逡逑半腕氨酸，这对于ＨＤＬＣＥ的选择性吸收至关重要；Ｎ末端和Ｃ末端位于胞质内，逡逑两个胞浆域分别含有８个（Ｎ末端）和４７个（Ｃ末端）氨基酸残基；两个跨膜域紧逡逑接着Ｎ末端和Ｃ末端，分别由２８个和２３个氨基酸残基构成ｌＡＭＩ。ＳＲ－ＢＩＩ是础－公／逡逑ｍＲＮＡ选择性剪切体，它们仅在胞内域的Ｃ末端有所差异ＩＭＩ。逡逑ＳＲ－ＢＩ邋ｐｒｏｔｅｉｎ逡逑８２－８５邋ｋＤａ逦０邋－邋ｃｌａｍｐ／ｐｏｚｋｉ逡逑巧：邋心逦，－Ｌ？如，Ｚｉｐｐｅｒ逡逑５０９邋ａ．ａ．逦々逦声邋Ｖ＊逦＠邋■邋ｐｔｓ－ｉ逡逑＾＾＜＾＾＊＊＊＊＊＊＊＊＊＊＂＊＊＊＾＾１＾、－／ｔｖ邋■邋Ｃｎｔｔｃａｉ邋ｒＭｔｄｕＭ逡逑／Ｎａ逦４０３邋ａ．ａ．逡逑ｆ邋＼逡逑ＣＸＸＸ＞0＜Ｚ＞00Ｃ：｜000000000000000000＾Ｃ－＞＜１＞？000＾0＊逡逑２８

转运到肝脏进行再循环或Ｗ胆酸形式排出体外的过程，这是机体清除多余胆固醇的逡逑重要生理途径。若ＲＣＴ过程受影响，血浆中过量的脂质将沉积在动脉壁，最终导致逡逑多种也脑血管疾病。肝脏ＳＲ－Ｂ１参与机体内ＲＣＴ邋—般分为Ｈ个步骤（如图１－３）：逡逑第一步最为关键，即胆固醇从肝外组织细胞中转出：细胞膜上的ＡＴＰ结合盒转运蛋逡逑白邋Ａ１邋（ＡＴＰ－ｂｉｎｄｉｎｇｃａｓｓｅｔｔｅｔｒａｎｓｐｏｒｔｐｒｏ化ｉｎＡｌ，ＡＢＣＡｌ）将细胞内自由胆固醇转运逡逑出细胞外，与ａｐｏＡｌ结合生成盘状前ｐ－ＨＤＵ第二步为胆固醇的醋化及胆固醇醋逡逑的转运：血浆中的卵a愔�胆固醇脂酷转移酶（ｌｅｃ地ｉｎ：邋ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ邋ａｃｙｌ邋ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，逡逑ＬＣＡＴ）将卵x镏�的脂憸基转移到胆固醇}L基上，使胆固醇发生醋化；ＨＤＬＣＥ在胆逡逑固醇醋转运蛋白（ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｙｌ邋ｅｓｔｅｒ邋ｔｒａｎｓｆｅｒ邋ｐｒｏｔｅｉｎ，邋ＣＥＴＰ）的作用下，被转运至ＶＬＤＬ逡逑生成Ｌ化；第Ｈ步为ＨＤＬ被肝细胞吸收；肝细胞膜上皿Ｌ受体－ＳＲ－Ｂ１可选择性逡逑吸收胆固醇醋，最终合成胆汁酸或直接通过胆汁排出体外，也可传递到类固醇激素逡逑生成组织（肾上腺、卵巢和睾丸等）生成类固醇激素。逡逑先前研究已经证实

图２－１大鼠邸－Ｓ７基因的扩增曲线和溶解曲线逡逑Ｆｉｇ．２－１邋Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ邋ａ打ｄ邋ｍｅｌｔｉ打ｇ邋ｃｕｒｖｅｓ邋ｏｆ邋ｒａｔ邋５／？－巧７邋ｇｅｎｅ逡逑

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本文编号：2832863