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广西地区犬细小病毒的分子流行病学调查研究

发布时间:2020-10-09 16:19
   为了解广西地区犬细小病毒病的流行病学情况,及时发现和掌握疫情动态,现将2015年1月1日至2017年12月31日期间,在广西地区的11861例犬传染性病毒病(以犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)、犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)、犬冠状病毒(canine coronavirus,CCV)为主)及其中7107例犬细小病毒病单一感染和犬细小病毒病混合感染的门诊记录情况进行调查分析。结果表明:犬细小病毒感染存在性别、年龄、品种、季节和免疫状况等方面的差异,其中公犬感染率高,2-3月龄幼犬感染率高,纯种犬发病率高,3-5月份犬发病率高,未免疫接种的犬感染率高。本实验建立了快速检测犬细小病毒的PCR方法,最低能检测出5-6×6.1342ng/μL的病毒DNA。随机采集2016~2017年来自广西地区的120只患病动物应用胶体金免疫层析法确诊为犬细小病毒的临床病料,应用已建立的PCR检测方法对其进行二次检测,120只患病动物的病料均为阳性,检出率为100%。PCR方法检测CPV具有更高的灵敏性,而胶体金免疫层析法在临床操作上更加快捷简便。通过对广西不同地区的120份临床病料的CPV VP2全基因测序结果进行CPV亚型分析,发现CPV-2c亚型占59.17%(71/120),CPV--2亚型占25.83%(31/120),CPV-2b 亚型占 15.00%(18/120),表明 2016~2017年广西地区的CPV主要流行的亚型为CPV-2c和CPV-2a,而CPV-2b的比例较低,无CPV-2亚型,这也是广西地区首次发现CPV-2c;分离株之间以及与参考毒株之间的核苷酸序列、氨基酸序列的同源性都较高。通过对从PCR鉴定VP2全基因为阳性的120份样品(粪便)DNA随机挑选出10份样品进行CPV全基因测序,从测序结果可知全基因的核苷酸同源性较高,但氨基酸同源性有高有低,而VP2的核苷酸及氨基酸的同源性都较高,再结合临床症状观察可知,这10个样品所对应的病犬的临床症状都符合犬细小病毒病的临床症状,所以CPV起抗原决定簇作用的部位在VP2片段上,与报道相符合。综上所述,广西地区犬细小病毒病的分子流行病学调查及遗传差异分析,为探讨临床免疫失败的原因及有针对性地开发宠物用CPV疫苗奠定了理论基础。
【学位单位】:广西大学
【学位级别】:硕士
【学位年份】:2018
【中图分类】:S858.292
【部分图文】:

退火温度,犬细小病毒,片段


57.0oC、58.0°C、59.0。0、60.00C的退火温度中,均可扩增出明显的DNA片段,且扩增逡逑出来的DNA片段值与期望值693bp相当,最后通过从各方面因素考虑,选择最终的退逡逑火温度为55.0°C邋(图3-1)。逡逑M邋1逦2逦3逦4逦5逦6789逦10逡逑__邋Jl?■栜:1j#二逡逑2000邋bp逡逑图3-1邋PCR检测的最佳退火温度逡逑Fig.3-1邋The邋optimum邋annealing邋temperature邋for邋PCR邋detection逡逑M:邋DL2000邋DNAMarker;邋1?10为犬细小病毒DNA的PCR产物,退火温度分别为51.0°C、52.0°C、逡逑53.0。。、54.0。0、55.0°C、56.0。0、57.0°C、58.0。。、59.0。。、60.0。0。逡逑3.3.I.2最适DNA模板量的确立逡逑通过琼脂糖凝胶电泳显示,观察到在犬细小病毒(CPV)DNA模板的量分别为0.2pL、逡逑0_4jjL、0.6|iL、0.8pL、l_0pL、1.2|iL、1.4叫、1.6pL、1.8|iL、2.0nL邋中,均可扩增出明逡逑显的DNA片段,且扩增出来的DNA片段值与期望值693bp相当,最后通过从各方面逡逑因素考虑

引物,犬细小病毒


逦广西地区犬细小病毒的分子流行病学调查研究逡逑M邋123456789逦10逡逑图3-2邋PCR检测的最佳DNA模板量逡逑Fig.3-2邋The邋optimal邋DNA邋template邋amount邋for邋PCR邋detection逡逑M:邋DL2000DNAMarker;邋1?10为犬细小病毒DNA的PCR产物,犬细小病毒DNA模板的量分别逡逑为邋0.2jiL、0.4jiL、0.6|aL、0.8jjJL、l.OjiL、1.2(iL、1.4|iL、1.6jiL、1.8|iL、2.0|iL。逡逑3.3.1.3最适引物量的确立逡逑通过琼脂糖凝胶电泳显示,观察到在上下游引物(GXP-F1和GXP-R1)的量分别逡逑为邋0.2pL、0.4|iL、0.6(iL、0_8|iL、1.0(_iL、1.2(JL、1.4jiL、1.6(iL、1.8|iL、2.0(iL邋中,均逡逑可扩增出明显的DNA片段,且扩增出来的DNA片段值与期望值693bp相当,最后通逡逑过从各方面因素考虑,选择最终的引物量均为1.0逦(图>3)。逡逑M邋1逦2逦3逦4逦5逦6逦7逦8逦9逦10逡逑\逦、v/邋<V”;逦>邋w邋、邋V逦:邋,丫邋、?4逡逑__焌嫇趣~杶朸~霉i媝囊1嫇灥逡逑bp逦广':逡逑图3-3邋PCR检测的最佳引物量逡逑Fig.3-3邋The邋optimum邋primer邋quantity邋for邋PCR邋detection逡逑M:邋DL2000DNAMarker;邋1?10为犬细小病毒DNA的PCR产物

模板,反应体系,犬细小病毒,引物


__焌嫇趣~杶朸~霉i媝囊1嫇灥逡逑bp逦广':逡逑图3-3邋PCR检测的最佳引物量逡逑Fig.3-3邋The邋optimum邋primer邋quantity邋for邋PCR邋detection逡逑M:邋DL2000DNAMarker;邋1?10为犬细小病毒DNA的PCR产物,引物(GXP-F1和GXP-R1)的逡逑量分别为邋0.2叫、0.4nL、0.6叫、0.8[iL、l.OpL、1.2|aL、1.4叫、1.6叫、1.8叫、2.0nL。逡逑3.3.1.4邋PCR反应体系和循环参数的确立逡逑3.3.1.4.1PCR反应体系逡逑27逡逑

【参考文献】

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本文编号:2833910

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