绵羊肺炎支原体及其脂质相关膜蛋白引起巨噬细胞细胞因子释放机制的研究

发布时间：2020-10-10 09:56

　　 绵羊肺炎支原体(Mycoplasmaovipneumonime M ovi)可在绵羊和山羊中引起羊支原体性肺炎,该病是一种广泛流行的高度接触性传染病。先天免疫细胞利用细胞质膜和胞浆内的受体对支原体的识别以及激活可能是引起羊机体某些免疫反应的主要原因。Toll样受体(toll-like receptors,TLRs)是目前己知的主要受体,在识别病原相关分子模式(pathogen associated molecular patterns,PAMPs)和内源性损伤相关分子模式(damage associated molecular patterns,DAMPs)大分子中发挥着重要的作用。该类受体参与对肺炎支原体的识别,从而诱导宿主的适当免疫应答反应并清除感染,或诱导产生慢性炎症。1.本实验利用AM.ovi及其脂质相关膜蛋白(lipid-related membrane proteins,LAMPs)分别刺激C57BL/6J、Tlr2-/-和Nlrp3--三种小鼠的腹腔巨噬细胞,并通过荧光定量PCR、流式细胞术、Western blot和ELISA等实验手段分别对巨噬细胞TLR2和NLRP3受体,相关NF-κB、促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)和caspase-1信号通路,以及细胞因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达、激活和分泌情况分别进行检测。实验结果表明(1)M ovi和其LAMPs可引起小鼠腹腔巨噬细胞表面TLR2及胞内NLRP3受体基因及蛋白表达水平升高。(2)M ovi和其LAMPS可通过小鼠腹腔巨噬细胞TLR2及NLRP3受体激活NF-κB、MAPK和caspase-1信号转导通路。(3)M ovi和其LAMPS可通过小鼠腹腔巨噬细胞TLR2及NLRP3受体引起细胞因子TNF-α和IL-1β分泌的增多。2.本实验在成功分离绵羊肺泡巨噬细胞的基础上,利用Movi和其LAMPS对其进行刺激,通过荧光定量PCR以及流式细胞术分别对细胞TLR2和NLRP3受体的基因和蛋白表达情况进行检测。利用Western blot和ELISA方法对NF-κB和MAPK信号通路以及细胞因子TNF-α和IL-1β的表达水平进行检测。同时,利用相应的受体功能抑制性抗体和信号蛋白抑制剂对受体和信号通路进行抑制,并做相应检测。实验结果表明(1)M ovi和其LAMPs可引起绵羊肺泡巨噬细胞表面TLR2及胞内NLRP3受体基因及蛋白表达水平升高。(2)M ovi和其LAMPs可激活绵羊肺泡巨噬细胞中NF-κB和MAPK信号转导通路。(3)M ovi和其LAMPs可使绵羊肺泡巨噬细胞的细胞因子TNF-α和IL-1β分泌增多。(4)TLR2功能抑制性抗体可阻断M ovi和其LAMPs激活绵羊肺泡巨噬细胞中NF-κB和MAPK信号转导通路,并降低细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌。(5)M ovi和其LAMPS刺激绵羊肺泡巨噬细胞后,NF-1κB和MAPK功能抑制剂可降低细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌。
【学位单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S858.26
【部分图文】：

图３巨噬细胞表面ＬＰＳ和ＬＰＰ相互作用的机制逡逑Ｆｉｇ．邋３邋Ｐｏｓｓｉｂｌｅ邋ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ邋ｏｆ邋ａｃｔｉｔ＞ｎ邋ｏｆ邋ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ邋（ＬＰＳ）邋ａｎｄ邋ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ邋（ＬＰＰ）邋ａｔ邋ｔｈｅ?

图４邋ＮＭ２０１０株生长曲线测定结果逡逑Ｆｉｇ．邋４邋Ｇｒｏｗｔｈ邋ｃｕｒｖｅ邋ｏｆ邋ＮＭ２０１０邋ｓｔｒａｉｎ逡逑

图５你ｍ／刺激小鼠巨嗤细胞后７Ｖ／－２基因的表达逡逑Ｆｉｇ．邋５邋Ｔｌｒ２邋ｇｅｎｅ邋ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｂｙ邋ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ邋ａｆｔｅｒ邋Ｍ．邋ｏｗ－ｔｒｅａｔｅｄ逡逑

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本文编号：2835039