重组鸡GSTA3和Ex-FABP分别对TD肉鸡红细胞免疫基因转录的影响

发布时间：2020-10-22 22:25

　　 研究表明鸡红细胞能转录TLRs,但人们对红细胞的其他基因转录功能仍不清楚;肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)可导致大量坏死软骨细胞堆积,前期研究发现重组鸡谷胱甘肽S-转移酶A3(chGSTA3)和细胞外脂肪酸结合蛋白(Ex-FABP)有助于TD的恢复,为探讨红细胞免疫相关基因转录功能及其与肉鸡TD的关系,以及chGSTA3和Ex-FABP对红细胞免疫相关基因的作用,本试验研究免疫相关基因在红细胞中的转录、在TD肉鸡转录水平的变化及重组chGSTA3和Ex-FABP对其转录的影响。将120只肉雏鸡喂养7天后,随机分为基础日粮组(A、B、C组)和福美双处理组(D、E、F),福美双拌入饲料中的浓度为100mg·kg-1,建立TD模型。采用腿部肌肉注射法,对B和E组肉雏鸡注射有活性的低剂量(20μg·kg-1体重)重组GSTA3蛋白,对C和F组肉雏鸡注射高剂量(50μg.kg-1体重)重组GSTA3蛋白,对A和D组的肉雏鸡注射等体积的磷酸盐缓冲液(PBS)。RT-PCR用于探究鸡红细胞19个免疫基因的转录,且Real-time PCR用于检测肉鸡红细胞中与免疫有关的9个基因在信使RNA水平的表达变化。结果表明,健康鸡红细胞能转录Toll样受体(TLR)-1,2,3,4,5,6,7,15,21、白细胞介素(IL)-7、12、13、干扰素(IFN)-α,β、髓样分化因子88(MyD88)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)、髓细胞生长因子(cMGF)、主要组织相容性复合体(MHC)II,I;D 组与 A 组相比,TLR2,3,4,5,7,15、MyD88 和 MHCII在试验的第4天显著升高,IL-7显著降低;在第15天,TLR2,4和MyD88显著下调,而IL-7、TLR3,5,7,15、MHCII变化不明显;E、F组与D组相比,在试验第4天,除E组TLR4,5、MyD88外,其余基因都有显著变化;第15天,E 组 TLR4,5、MyD88,及 F 组 TLR3,5、MyD88 和 IL-7 变化不显著,其余基因都有显著性差异。鸡红细胞可能通过免疫相关基因TLR2,3,4,5,7,15、IL-7、MyD88和MHCII转录水平的变化,在早期诱导TD发生,后期减轻肉鸡TD症状;GSTA3可能通过调节红细胞免疫相关基因的转录在TD中发挥一定的作用。120只饲喂7天的肉雏鸡被随机等分为基础日粮组(A、B、C组)和福美双饲喂组(D、E、F组)。对B和D组肉鸡腿部注射浓度为20 μg·kg-1体重的Ex-FABP,对C、E注射50 μg·kg-1体重的Ex-FABP,给A、F组注射等剂量的PBS,使用 Real-time PCR 检测肉鸡红细胞 TLR2,3,4,5,7,15、MyD88、MHCII和IL-7基因转录水平。结果表明,在饲喂福美双后的第6天,与F组相比,D和E组中的TLR2,3,4,5,7,15、MyD88和MHCII表达显著下调,而IL-7显著上调;在第15天,D组中的TLR2,3,4,5,7,15、MyD88和MHCII表达显著降低,而IL-7显著增加;除IL-7和TLR3表达不显著外,E组内其余基因均显著下调。B、C组与A相比,在第6天,除C组TLR3,5、MyD88、MHCII和IL-7,及B组TLR2,7外,其余基因都有显著性差异;在第15天,除了 B组IL-7外,其余基因都有显著变化。Ex-FABP可能通过调节红细胞TLR2,3,4,5,7,15、MyD88、MHCII 和 IL-7 转录而减轻 TD 症状。
【学位单位】：山西农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S858.31
【文章目录】：
摘要
前言
    1 禽红细胞
        1.1 红细胞大小和颜色
        1.2 红细胞免疫作用
    2 胫骨软骨发育不良
        2.1 正常骨发育
        2.2 胫骨软骨发育不良
    3 谷胱甘肽S-转移酶
        3.1 GSTs在酶解毒中的作用
        3.2 谷胱甘肽硫转移酶A3
    4 脂肪酸结合蛋白
        4.1 FABP主要功能和类别
        4.2 细胞外脂肪酸结合蛋白
    5 细胞凋亡
        5.1 TLRs与凋亡
        5.2 细胞因子与细胞凋亡
    6 研究目的与意义
第一章 重组鸡GSTA3蛋白对福美双诱导TD肉鸡红细胞免疫相关基因转录的影响
    1 试验材料
        1.1 试验动物
        1.2 试验试剂
        1.3 主要试验仪器
    2 试验方法
        2.1 动物处理
        2.2 鸡红细胞分离和红细胞RNA提取及质量检测
        2.3 cDNA的合成
        2.4 引物设计与合成
        2.5 RT-PCR反应
        2.6 RT-PCR产物大小及特异性的鉴定
        2.7 Real time PCR
        2.8 数据分析
    3 试验结果
    4 讨论
    5 小结
第二章 Ex-FABP对福美双诱导TD肉鸡红细胞免疫相关基因转录的影响
    1 试验材料
        1.1 试验动物
        1.2 试验试剂
        1.3 主要试验仪器
    2 试验方法
        2.1 动物处理
        2.2 鸡红细胞分离,RNA提取,cDNA的合成及引物的设计与合成
        2.3 Real-time PCR,数据分析
    3 试验结果
    4 讨论
    5 小结
全文结论
参考文献
Abstract
致谢

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