四川绵阳地区猪蓝耳病检测及其分子流行病学分析

发布时间：2020-10-30 14:00

　　 猪繁殖呼吸综合征PRRS(Porcine reproductive and respiratory syndrome,又称猪蓝耳病)是由PRRSV感染造成的,目前在世界范围内广泛流传,主要导致母猪的繁殖能力差,抵抗能力弱,继发疾病率和高死亡率较高,是现代养殖业重点预防的疾病,以避免给养猪业带来的灾难性损失,同时维护畜产品安全和环境卫生。为及时、有效地了解地域性PRRS病的感染和流行情况,ELISA检测抗体的方法和RT-PCR检测抗原的方法在生产实践和实验室得到了最经常的使用,以及从分子生物学层面分析高致病性PRRSV的遗传变异情况,为下一步科学的防控该病提供理论依据。本论文通过ELISA方法检测2013、2014年绵阳9个地区1404份血清进行了猪蓝耳病ELSA抗体检测,免疫PRRSV疫苗后血清的抗体平均阳性率为80.8%(达到了农业部的基本要求70%以上),未免疫猪蓝耳疫苗的血清抗体阳性率为14.3%。从不同采样群体来看,规模养殖场(91.8%)散养户(81.7%)屠宰场(70.5%)；2014年的抗体平均合格率较2013年平均合格率有所下降。还通过RT-PCR方法检测本实验中被检测的绵阳地区部分疑似发病猪场共采集病料78份,检测结果平均阳性率从大到小为高致病性PRRSV(35.90%)经典PRRSV(17.95%)HP-PRRSV+PRRSV(11.65%);而该地区被检测的部分屠宰样品282份中,经典PRRSV的阳性率为2.84%,高致病性PRRSV阳性率为11.70%,无HP-PRRSV+PRRSV混合感染。HP-PRRSV依然是该地区猪蓝耳病感染率最高的毒株类型。经过抗原检测后的病料中筛选出69个毒株,然后对目的基因Nsp2、ORF5进行RT-PCR扩增、纯化、测序分析。49个Nsp2基因序列的核苷酸之间的同源性为90.2%～100%,推导氨基酸的同源性为73.7%～100%；与LV核苷酸同源性为49.7%～50.0%,推导氨基酸的同源性为31.1%～37.2%；与VR-2332、MLV核苷酸同源性为79.2%～82.6%,推导氨基酸的同源性为60.8%～75.0%；与国内2006年以前BJ-4、HB-1(sh)、HN1毒核苷酸的同源性为79.0%～95.1%,推导氨基酸的同源性为70.9%～92.6%；与国内2006年及以后分离的毒株JXA1、SY0608等核昔酸同源性为93.1%～98.6%,推导氨基酸的同源性为83.0%～98.5%。同时获得的20个ORF5之间核苷酸同源性为91.9%～100%,推导其氨基酸的同源性为88.0%～100%；与LV同源性为62.6%～65.8%,推导其氨基酸的同源性为56.6%～59.2%；与VR-2332同源性为88.2%～90.2%,推导其氨基酸的同源性为86.5%～89.0%；与2006年以前毒株HN1同源性为87.1%～90.2%,氨基酸的同源性为84.5%～90.0%；与2006年及以后毒株JXA1、SXHZ01同源性为95.2%～99.2%,氨基酸的同源性为89.0%～99.0%。预测GP5的N-糖基化位点以4～5个为主,其诱骗表位A处存在突变,而中和表位B较为保守,准种进化是野毒株(S137)；这些说明绵阳地区HP-PRRSV变异情况与国内其它流行毒株存在差异,发现了新的AA缺失区段和突变位点,同源性和构建进化树表明都属于美洲基因型且与JXA1在一个亚群中,与2006年及以后发现的毒株亲缘关系较近。
【学位单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2015
【中图分类】：S858.28
【文章目录】：
中文摘要
abstract
缩略词表
第一章 文献综述
    1. 猪繁殖与呼吸综合征病毒
        1.1 病毒的形态和分类
        1.2 PRRSV的致病机理
    2. 猪繁殖与呼吸综合征病检测研究进展
        2.1 PRRSV的分离鉴定
        2.2 PRRSV血清学检测研究进展
        2.3 分子生物学检测PRRSV技术的研究进展
    3. 猪繁殖与呼吸综合征分子流行病学研究进展
        3.1 PRRSV传染特性和流行情况
        3.2 PRRSV基因组机构
        3.3 高致病性蓝耳病（HP-PRRSV）的遗传变异规律
    4. 本研究的目的和意义
    5. 研究内容
    6. 研究路线
第二章 四川绵阳地区猪蓝耳病检测及其分子流行病学分析
    1. 实验材料与方法
        1.1 绵阳地区（2013～2014）部分猪群蓝耳病免疫抗体检测实验材料与方法
        1.2 绵阳地区（2013～2014）猪蓝耳病抗原测实验材料与方法
        1.3. HP-PRRSV的Nsp2、ORF5的遗传变异研究实验材料与方法
    2. 实验结果与分析
        2.1 不同地方猪蓝耳病抗体检测情况
        2.2 不同采样群体猪蓝耳病抗体检测情况
        2.3 PCR电泳结果
        2.4 绵阳疑似发病猪场的PRRSV感染情况
        2.5 绵阳各县屠宰场送检样品检测结果
        2.6 绵阳地区不同时间的PRRSV感染情况
        2.7 Nsp2、ORF5基因的扩增和序列测定
        2.8 Nsp2基因核苷酸序列和推导氨基酸的同源性分析
        2.9 Nsp2基因遗传进化树分析
        2.10 Nsp2基因推导氨基酸的变异分析
        2.11 ORF5基因核苷酸序列和翻译氨基酸的同源性分析
        2.12 GP5蛋白糖基化位点和抗原表位分析
        2.13 ORF基因构建系统发育进化树分析
    3. 讨论
        3.1 猪蓝耳病抗体检测分析
        3.2 猪蓝耳病抗原检测分析
        3.3 Nsp2和ORF5遗传变异分析
    4. 结论
        4.1 抗体检测
        4.2 抗原检测
        4.3 Nsp2、ORF5基因的遗传变异
参考文献
致谢

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本文编号：2862570