猪源产生物被膜乳酸菌的筛选及初步应用

发布时间：2020-10-30 23:11

　　 养猪业作为传统养殖业中重要的一员,在我国肉食品市场中占有巨大的份额。随着养猪业的规模化和集约化养殖,养猪业却普遍存在着滥用抗生素及药品的现象。为了筛选具有可靠动物安全性、具有生物被膜形成能力及抑菌性能且生物学特性良好的乳酸菌菌株,以便适用于乳酸菌益生制剂的开发与生产,本研究从吉林农业大学养殖基地挑选健康仔猪粪样筛选出119株革兰氏阳性疑似乳酸菌分离株。经过生物被膜形成能力检测与常见病原菌抑菌实验,筛选出7株具有良好生物被膜形成能力及抑菌能力的分离株,分别命名为:Z-01、Z-02、Z-03、Z-04、Z-05、Z-06和Z-07。经过分子生物学鉴定,确认其中Z-01、Z-02、Z-03、Z-04和Z-05为屎肠球菌,Z-06为乳酸肠球菌,Z-07为嗜酸乳杆菌。为了筛选得到生物学特性良好的乳酸菌,通过进行产酸能力检测、耐胆盐试验、耐高温试验、耐胰蛋白酶试验、耐酸试验以及常见抗菌药敏感试验等试验,得出如下结论:7株乳酸菌分离株的产酸能力较为接近,上清液pH值3.44-4.25之间;在0.4%胆盐浓度下,Z-07存活率为24%,Z-03存活率为19.1%,其余5株分离株存活率为10%-15%之间;50℃、55℃和60℃的分离株OD值与37℃相比无明显变化,证明7株分离株对高温环境具有一定耐受性;7株菌在最高浓度的1.4%胰蛋白酶影响下,存活率均维持在77%-94%之间;7株菌在pH值为2.0的环境中,Z-04存活率最高为44.6%;Z-03和Z-07对氨苄西林表现为中度敏感,而Z-01、Z-02、Z-04、Z-05和Z-06对氨苄西林表现为耐药。从7株分离株选择生物学特性优良的Z-03和Z-07,进行动物安全性试验、沙门氏菌半数致死量实验和乳酸菌的抑菌实验,结果如下:2株分离株Z-03和Z-07具有可靠的动物安全性,具有较好的益生作用;对沙门氏菌CVCC-503,屎肠球菌Z-03和嗜酸乳杆菌Z-07具有一定抑菌保护作用。本研究成功筛选屎肠球菌Z-03和嗜酸乳杆菌Z-07,具有良好的抑菌能力和生物被膜形成能力,其优良的生物学特性为其在益生菌制剂的开发和利用中提供理论依据。
【学位单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S852.61
【部分图文】：

图1.1分离株菌落形态

6 孔板法对目的乳酸菌菌株生物被膜形成能力进成能力如图 1.2 所示。Z-03 、Z-04、Z-05、Z-数值高 4 倍，具有较强生物被膜形成能力；而生于D595 数值处于空白对照组数值的 2-4 倍之间，力。

切胶回收后由上海生工完成进行比对。参考相关菌株的 -Joining 法构建所筛功能菌株、Z-04 和 Z-05 为屎肠球菌，图 1.3 分离株 16s rDNA 序列扩6SrDNAgene PCR amplification re1~7：分离株 Z-01、Z-02、Z-03、产物Z-01Z-04Z-03Enterococcus faecium straZ-02
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本文编号：2863128