猪子宫内膜炎肺炎克雷伯菌噬菌体的分离鉴定及初步应用研究

发布时间：2020-11-01 05:48

　　 猪子宫内膜炎是危害养猪业的重大疾病之一,主要引起母猪繁殖障碍、仔猪腹泻等症状,严重地影响了猪场的经济效益。近年来,随着抗生素的不合理使用,耐药菌株持续增多,耐药征象日益严重,猪子宫内膜炎的防治越发困难。噬菌体是一种能特异性感染并杀死细菌的病毒,它能在细菌体内快速繁殖,并跟随细菌的改变而改变,以噬菌体作为新型抗生素替代剂诊治细菌性疾病已被人们广泛关注。本研究利用药敏试验筛选出具有多重耐药性的猪子宫内膜炎病原菌肺炎克雷伯菌作为噬菌体宿主菌,采用双层平板法从健康猪群粪便和牛群粪便中分离纯化到相应的裂解性噬菌体,分别命名为KP1和KP2,对二者的核酸类型、生理生化性质及其抵抗感染的能力进行初步应用研究。生理生化试验结果表明,两株肺炎克雷伯菌噬菌体KP1和KP2的宿主谱较窄,对宿主菌的特异性很强;它们都以双链DNA分子为遗传物质;对氯仿和乙醚有抗性,说明两株噬菌体没有囊膜。透射电镜观察下可见KP1属于肌尾病毒科噬菌体,它有一个二十面体立体对称的头部,直径约为78±1.5 nm,尾长约为109±2 nm,在温度为40~60℃或pH值为4~12的条件下有较高活性,最佳感染复数为0.1,一步生长曲线显示其感染宿主菌的潜伏期约20 min,裂解期约60min,平均裂解量约为15.4 PFU/cell。噬菌体KP2亦有一个二十面体立体对称的头部,直径74.67±1.43 nm,尾长95.87±1.67 nm,是肌尾病毒科的一员,在40~60℃温度下或pH值3~11的环境中均可有效裂解宿主菌,最佳感染复数为0.01,一步生长曲线显示潜伏期约30 min,裂解期约80 min,平均裂解量约10.75 PFU/cell。噬菌体KP1和KP2分别对耐药猪子宫内膜炎病原菌肺炎克雷伯菌具有很强的体外裂解活性,噬菌体安全性试验检测显示两株噬菌体无毒副作用。二者的混合制剂对宿主菌引起的家兔子宫炎症有一定的防治作用。
【学位单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：S858.28
【部分图文】：

3.2 噬菌体的分离纯化于长春市各个饲养场多次采集健康猪群的粪便样品，与试验筛选的多重耐炎克雷伯菌混合培养，多次富集，最后用点滴法对培养结果进行验证，结果，成功分离出一株肺炎克雷伯菌噬菌体。如图 1.2 所示，阴性对照区域菌株情况正常，样品区域长出无菌空斑。利用双层平板法对所分离的噬菌体反复 4 次，方可得到大小均一、透亮的噬菌斑。如图 1.3，命其命为 KP1。图 1.1 肺炎克雷伯菌 414 菌株药敏试验Fig.1.1 Antimicrobial susceptibility test of Klebsiella pneumoniae 414：1、诺氟沙星；2、多粘菌素 B；3、头孢唑林；4、头孢噻肟；5 阿米卡星；6、庆大霉素；7、卡素；8、链霉素；9、新霉素；10、四环素；11、多西环素；12、阿奇霉素ote: 1, norfloxacin 2, polymyxin 3, cefazolin 4, cefotaxime 5 amikacin 6, gentamicin 7, kanamycin 8,streptomycin 9, neomycin 10, tetracycline 11, doxycycline 12, azithromycin

3.2 噬菌体的分离纯化于长春市各个饲养场多次采集健康猪群的粪便样品，与试验筛选的多重耐炎克雷伯菌混合培养，多次富集，最后用点滴法对培养结果进行验证，结果，成功分离出一株肺炎克雷伯菌噬菌体。如图 1.2 所示，阴性对照区域菌株情况正常，样品区域长出无菌空斑。利用双层平板法对所分离的噬菌体反复 4 次，方可得到大小均一、透亮的噬菌斑。如图 1.3，命其命为 KP1。图 1.1 肺炎克雷伯菌 414 菌株药敏试验Fig.1.1 Antimicrobial susceptibility test of Klebsiella pneumoniae 414：1、诺氟沙星；2、多粘菌素 B；3、头孢唑林；4、头孢噻肟；5 阿米卡星；6、庆大霉素；7、卡素；8、链霉素；9、新霉素；10、四环素；11、多西环素；12、阿奇霉素ote: 1, norfloxacin 2, polymyxin 3, cefazolin 4, cefotaxime 5 amikacin 6, gentamicin 7, kanamycin 8,streptomycin 9, neomycin 10, tetracycline 11, doxycycline 12, azithromycin

于长春市各个饲养场多次采集健康猪群的粪便样品，与试验筛选的多重耐药肺炎克雷伯菌混合培养，多次富集，最后用点滴法对培养结果进行验证，结果显示，成功分离出一株肺炎克雷伯菌噬菌体。如图 1.2 所示，阴性对照区域菌株生长情况正常，样品区域长出无菌空斑。利用双层平板法对所分离的噬菌体反复纯化 4 次，方可得到大小均一、透亮的噬菌斑。如图 1.3，命其命为 KP1。图 1.1 肺炎克雷伯菌 414 菌株药敏试验Fig.1.1 Antimicrobial susceptibility test of Klebsiella pneumoniae 414注：1、诺氟沙星；2、多粘菌素 B；3、头孢唑林；4、头孢噻肟；5 阿米卡星；6、庆大霉素；7、卡那霉素；8、链霉素；9、新霉素；10、四环素；11、多西环素；12、阿奇霉素Note: 1, norfloxacin 2, polymyxin 3, cefazolin 4, cefotaxime 5 amikacin 6, gentamicin 7, kanamycin 8,streptomycin 9, neomycin 10, tetracycline 11, doxycycline 12, azithromycinKP1阴
【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 王立娇;;母猪子宫内膜炎的防治[J];北京农业;2015年30期

2 赵会玲;;2013～2014年肺炎克雷伯菌医院感染特点及耐药性分析[J];中国现代医生;2015年25期

3 王延峰;孟媛;付江波;;母猪子宫内膜炎的危害及综合防治措施[J];畜牧与饲料科学;2015年08期

4 靳静;陈松建;张改;王书伟;李振江;李亚辉;王进;王中全;;克雷伯菌属噬菌体LH-01的生物学特性及其对败血症小鼠疗效的初步研究[J];中国病原生物学杂志;2015年01期

5 靳静;张改;李振江;王书伟;陈松建;黄德海;李亚辉;王小亭;王中全;;粘质沙雷菌毒性噬菌体PS4的生物学特性及其在小鼠血清中的杀菌作用研究[J];中国病原生物学杂志;2015年02期

6 张红凤;;母畜子宫内膜炎的症状和治疗措施探讨[J];中国动物保健;2015年02期

7 张延龙;刘新发;王林庚;;常见母猪子宫内膜炎的危害及诊治[J];江西畜牧兽医杂志;2014年06期

8 宋彬;;母猪子宫内膜炎的防治[J];当代畜牧;2014年27期

9 周维;戴翼斌;;89例新生儿肺炎克雷伯菌感染特征及药敏分析[J];湖北民族学院学报(医学版);2014年01期

10 刘晓强;劳小斌;严海燕;;1419株肺炎克雷伯菌分布特点及耐药性分析[J];中国卫生检验杂志;2013年07期

本文编号：2865109