狂犬病分子流行病学及狂犬病毒感染小鼠代谢组学研究

发布时间：2020-11-09 00:06

　　 第一章狂犬病分子流行病学狂犬病是由狂犬病毒(RABV)感染引起的人畜共患传染病,具有极高的病死率,每年全球仍有数万人死于狂犬病,其中95%以上发生在资源相对匮乏的亚洲和非洲国家。我国是狂犬病高发国家,每年因狂犬病死亡人数居于法定传染病第三位。尽管从2007年开始我国狂犬病感染人数明显下降,但是狂犬病已经传播到了新的地区。近年来,北部和西部省份出现多起野生动物引起的家畜狂犬病疫情及病犬咬伤导致的人狂犬病病例,并且出现新的毒株。此外,周边国家均有狂犬病流行。为了解我国狂犬病疫情毒株类型、变化特征、不同流行区域疫情的变化趋势以及我国与周边国家狂犬病之间的关系,本研究开展动物狂犬病分子流行病学与时空进化分析。首先对套式RT-PCR方法检测狂犬病毒属成员的通用性、灵敏度、特异性进行验证,结果证明该方法可以成功检测出狂犬病毒属所有18个种。使用狂犬病诊断金标准直接免疫荧光法和套式RT-PCR检测306份动物脑组织样品,确诊的28份阳性样本,扩增其N基因片段并测序,获得了25株新的RABV N基因序列。结合GenBank数据库中国和周边国家狂犬病流行株的N基因序列及其背景信息,进行分子流行病学研究。结果将我国RABV分为4个进化群,分别是亚洲群、北极相关群、世界群和印度次大陆群。分析各进化群毒株传播来源、分布范围发现,犬仍是我国狂犬病的主要传播来源,但是狐狸等野生动物狂犬病不容忽视。我国的狂犬病已经遍布各省市自治区,并有明显的地域特征,我国与周边国家狂犬病存在持续的跨境传播现象,本研究首次明确了各进化群毒株跨境传播路径。第二章狂犬病毒感染小鼠代谢组学研究RABV是典型的嗜神经性病毒,在侵入中枢神经系统后引起明显的神经系统症状并引发宿主死亡。但在中枢神经系统仅具有弱的炎症和少量神经退行性变化等相对温和的神经病理变化,并不导致神经系统损伤。目前RABV引起宿主神经系统功能障碍的机制还不清楚。本研究建立了小鼠感染RABV模型,以感染狂犬病固定毒CVS-11和街毒株GDMM的小鼠为研究对象,选取病程中期和晚期两个采样点。基于液相色谱-质谱(LC-MS)联用的代谢组学方法,结合PCA、PLS-DA、OPLS-DA多元统计分析方法对各分组进行两两对比分析,筛选差异性代谢物。首次获得RABV感染小鼠脑组织的代谢全谱。结果表明感染RABV的鼠脑组织中存在代谢异常,导致至少185种代谢物出现差异,包括神经递质、核酸和能量代谢的改变。固定毒和街毒株在部分代谢物的改变趋势上存在差异,提示RABV感染引起的中枢神经系统内变化存在不同,本研究为阐明RABV致病机理提供了新的线索。
【学位单位】：军事科学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S855.3
【部分图文】：

军事科学院硕士学位论文原因，我们对外套 PCR 和内套 PCR 的引物序列与狂犬病毒属 18 种成员基因序列进行比较，通过图 1.2 可以发现，未成功扩增的情况 ARAV 外套引物 N829 3`端最末的碱基不匹配，成功扩增的质粒的引物 3`端最后 个碱基均与质粒相同，可见 3`端最后 个碱基在扩增中是至关重要的；IKOV 的内套引物 N371F3`端第2 和第 4 碱基不匹配，但是 LLEBV 也是与内套引物 N371F 3`端第 2 和第 4 碱基不匹配，但是 IKOV 在第 2 位是嘌呤，LLEBV 是嘧啶，引物在此位置的碱基 T是嘧啶。可能碱基类型的差别导致了扩增情况的不同。

军事科学院硕士学位论文1.3.3 分子流行病学研究结果根据系统进化分析，我国 RABV 毒株分为亚洲群（Asian）、世界群（Cosmopolitan）、北极相关群（Arctic Related）和印度次大陆群（IndianSubcontinent）。其中亚洲群流行于我国和东南亚诸国，其中我国有 SEA 1、2、3、5 亚型的分布，世界群在全球广泛分布，其中草原型（Central Asian 1, Steppetype）流行于俄罗斯、中亚地区和我国的内蒙、新疆，其他型（other）在我国和周边国家散在分布；北极相关群流行于北极圈、俄罗斯、韩国、印度、尼泊尔和我国的青海、西藏、黑龙江、内蒙古，其中 AL1 分布于印度和尼泊尔 带，AL2分布于我国、韩国和俄罗斯。

军事科学院硕士学位论文Table 1.9 Migration event resultslineage P 值 from to FDRSteppe 0.004 中国新疆省 俄罗斯 0.003571Steppe 0.0207 哈萨克斯坦 俄罗斯 0.007143Steppe 0.0708 蒙古国 中国内蒙古 0.010714Steppe 0.0917 蒙古国 中国新疆省 0.014286Arctic-like2 0.0883 俄罗斯 中国青海省 0.003571Arctic-like2 0.0911 俄罗斯 蒙古国 0.007143Arctic-like2 0.0924 俄罗斯 中国西藏 0.010714Arctic-like2 0.0928 俄罗斯 中国黑龙江省 0.014286SEA 3 0.0048 中国 老挝 0.000758SEA 3 0.014 中国 柬埔寨 0.001515SEA 3 0.0363 中国 缅甸 0.002273SEA 3 0.0474 中国 泰国 0.00303
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本文编号：2875564