重组粒细胞集落刺激因子对小鼠大肠杆菌性乳房炎的预防效果研究

发布时间：2017-04-06 02:03

  本文关键词：重组粒细胞集落刺激因子对小鼠大肠杆菌性乳房炎的预防效果研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：乳房炎是母畜的常见疾病之一,尤其奶牛乳房炎给养殖业带来了严重的经济损失。奶牛临近分娩时,血液中的白细胞减少,尤其是中性粒细胞显著减少是引起奶牛产后感染疾病如子宫内膜炎、乳房炎的关键因素之一。粒细胞集落刺激因子(G-CSF)是参与调节骨髓粒系造血的主要细胞因子,能够促进骨髓中粒系祖细胞的增殖、分化,增加外周血的中性粒细胞数量和促进成熟中性粒细胞的游走、吞噬、杀菌能力及对外来物质的粘附。因此,G-CSF可望作为防治围产期奶牛乳房炎等感染性疾病的药物。通过建立小鼠大肠杆菌性乳房炎模型,探讨G-CSF对小鼠大肠杆菌性乳房炎的预防效果。方法：(1)选取泌乳8-10天的初产昆明小鼠24只,随机平均分成4组,与幼鼠隔离2h后, Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组小鼠第四对乳房两侧分别灌注25gL1.5×105CFU/mL1.5×107CFU/mL和1.5×109CFU/mL菌液,ⅣV组灌注等量灭菌生理盐水,建立小鼠大肠杆菌性乳房炎模型。(2)另选取120只泌乳8-10天的初产昆明小鼠,随机平均分为Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组、ⅣV组和V组。与幼鼠隔离2h后,Ⅰ、Ⅱ组皮下注射0.1mL生理盐水,Ⅲ、Ⅳ、V组分别按10g/kg、20μg/kg、30μg/kg体重皮下注射0.1mLrhG-CSF;24h后,Ⅰ组第四对乳房灌注50μl(25μL/侧)的生理盐水,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、组灌注含1.5x107CFU/mL大肠杆菌的菌液；在乳房灌注后的0h、24h、72h、120h,每组随机选取6只小鼠进行采样,检测血液生理指标、测定血清中TNF-α含量、乳腺组织大肠杆菌计数及乳腺组织病理学变化。结果：(1)小鼠大肠杆菌乳房炎模型建立：攻菌后24h,与IV组比较,Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组小鼠血清中的TNF-α极显著升高(P0.01);Ⅱ、Ⅲ组血清中的TNF-αa极显著高于Ⅰ组(P0.01)：Ⅲ组血清中的TNF-α极显著高于Ⅱ组(P0.01)。Ⅱ组乳腺出现广泛的充血,并伴有出血,乳腺局部红肿、变硬,有淡黄色的炎性渗出物和凝乳块：腺泡腔和小叶间质内嗜中性粒细胞显著增多,上皮细胞脱落、坏死,腺泡结构紊乱与周围组织界限不清,间质充血、出血,呈典型的乳房炎症状：Ⅰ组乳腺病变较Ⅱ组轻微,Ⅲ组乳腺病变较Ⅱ组更严重：Ⅳ组乳腺未见有异常病变。(2)rhG-CSF对小鼠大肠杆菌性乳房炎的保护效果：Ⅲ组小鼠精神不振,食欲轻微降低,被毛稍蓬乱,乳头发红：乳腺充血,稍肿胀；腺泡腔及间质有炎性细胞浸润：0h、24h、72h、120h,Ⅲ组小鼠WBC及GRA均极显著高于Ⅰ组和Ⅱ组(P0.01),72h-120h有2只小鼠临床症状明显好转。ⅣV组小鼠精神正常,乳房红、肿、痛等临床症状表现较微弱;乳腺轻微充血,无明显肿胀：乳腺组织结构清晰,上皮细胞排列整齐；0h、24h、72h、120h,ⅣV组小鼠WBC及GRA均极显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(P0.01)；24h-120h,Ⅳ组有3只小鼠临床症状逐渐消失。V组小鼠精神食欲良好,乳腺组织结构清晰,上皮细胞排列整齐,部分腺泡充满乳汁,无明显的乳房炎引起的组织损伤；0h、24h、72h、120h,V组小鼠的WBC及GRA均极显著高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组(P0.01)：至120h,该组小鼠临床症状基本消失。结论：(1)泌乳8-10天的初产昆明小鼠,第四对乳头灌注1.5×107CFU/mL大肠杆菌25ul/侧,可成功构建小鼠乳房炎模型。(2)20μg/kg、30μg/kg体重给予小鼠皮下注射0.1mLrhG-CSF对小鼠急性感染大肠杆菌性乳房炎均具有显著的预防效果。
【关键词】：粒细胞集落刺激因子 大肠杆菌 小鼠 乳房炎 预防效果
【学位授予单位】：四川农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S852.3
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 主要缩略词9-14
• 第一章 文献综述14-22
• 前言14-15
• 1 围产期奶牛乳房炎的发生特点与防治15-19
• 1.1 围产期奶牛的生理特点15
• 1.2 围产期奶牛乳房炎的发生特点15-16
• 1.3 围产期奶牛乳房炎的临床症状16
• 1.4 大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌是引起奶牛乳房炎的主要细菌16-18
• 1.4.1 大肠杆菌17
• 1.4.2 葡萄球菌17-18
• 1.4.3 链球菌18
• 1.5 防治奶牛乳房炎的主要药物18-19
• 1.5.1 抗生素18
• 1.5.2 中药18
• 1.5.3 细胞因子18-19
• 1.5.4 疫苗19
• 1.5.5 其他19
• 2 G-CSF的生物学功能及应用研究19-20
• 2.1 G-CSF的生物学功能19-20
• 2.2 G-CSF的临床应用20
• 2.2.1 配合抗生素治疗严重感染性疾病20
• 2.2.2 其他作用20
• 2.3 在兽医临床上的研究20
• 3 研究目的及意义20-22
• 第二章 昆明小鼠大肠杆菌性乳房炎模型的建立22-36
• 1 材料与方法22-25
• 1.1 主要仪器设备22
• 1.2 试验菌株和主要试剂22-23
• 1.3 试验动物23
• 1.4 大肠杆菌的培养及计数23
• 1.5 试验动物处理23-24
• 1.6 检测指标及方法24-25
• 1.6.1 临床观察24
• 1.6.2 乳房炎造模成功的临床判定标准24
• 1.6.3 血液采集及血清肿瘤坏死因子(TNF-α)检测24
• 1.6.4 病理组织学观察24-25
• 1.6.5 乳腺组织中大肠杆菌计数25
• 1.7 数据处理25
• 2 结果与分析25-32
• 2.1 大肠杆菌乳房炎的临床症状及评分25-27
• 2.2 病理组织学观察27-31
• 2.2.1 眼观病变27-28
• 2.2.2 组织学观察28-31
• 2.3 乳腺组织中大肠杆菌计数31
• 2.4 血清肿瘤坏死因子(TNF-α)检测31-32
• 3 讨论32-34
• 3.1 成功构建了昆明小鼠大肠杆菌乳房炎模型32-33
• 3.2 小鼠乳房炎造模的病原选择33
• 3.3 小鼠乳房炎造模的方法与评价标准33-34
• 3.4 大肠杆菌乳房炎小鼠的血清TNF-α变化34
• 3.5 大肠杆菌乳房炎小鼠乳腺组织的病理学变化34
• 4 小结34-36
• 第三章 rhG-CSF对昆明小鼠大肠杆菌乳房炎的预防效果试验36-52
• 1 试验材料与方法36-38
• 1.1 主要仪器设备36
• 1.2 主要材料与试剂36
• 1.3 试验动物36
• 1.4 试验动物的分组及处理36-37
• 1.5 观察指标37-38
• 1.5.1 临床评分37
• 1.5.2 血液生理指标检测37
• 1.5.3 病理组织学观察37
• 1.5.4 乳腺组织中大肠杆菌计数37-38
• 1.5.5 血清肿瘤坏死因子(TNF-α)检测38
• 1.6 数据处理38
• 2 结果38-49
• 2.1 rhG-CSF对小鼠大肠杆菌乳房炎临床症状的预防效果38
• 2.2 rhG-CSF对小鼠乳房炎发生率统计38-39
• 2.3 rhG-CSF对乳房灌注大肠杆菌小鼠白细胞及白细胞分类的影响39-41
• 2.4 rhG-CSF对乳房灌注大肠杆菌小鼠红细胞及血红蛋白等的影响41
• 2.5 rhG-CSF对乳房灌注大肠杆菌小鼠血小板等的影响41-46
• 2.6 病理组织学观察46-48
• 2.6.1 眼观病变46
• 2.6.2 组织学观察46-48
• 2.7 乳腺组织中大肠杆菌计数48
• 2.8 rhG-CSF对乳房灌注大肠杆菌小鼠血清TNF-α的影响48-49
• 3 讨论49-51
• 3.1 rhG-CSF对小鼠乳房炎临床症状的影响49-50
• 3.2 rhG-CSF对小鼠乳房炎发生率的影响50
• 3.3 rhG-CSF对乳房炎小鼠血液生理指标的影响50-51
• 3.4 rhG-CSF对乳房炎小鼠TNF-α的影响51
• 3.5 rhG-CSF对小鼠乳腺感染大肠杆菌计数的影响51
• 4 小结51-52
• 全文总结52-53
• 参考文献53-59
• 致谢59

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