龙血素B对脂肪细胞脂质合成的影响

发布时间：2020-11-17 10:29

　　 脂质代谢是体内重要且复杂的生化反应,指生物体内脂质在各种相关酶的催化下,消化吸收、合成与分解的过程,加工成机体所需要的物质,确保正常生理机能的运作,对于生命活动具有重要意义。脂质沉积是脂质代谢中重要的一部分,涉及到诸多领域,包括畜牧行业家禽家畜的肉质。近年来,天然产物参与成脂调控的研究逐渐成为研究的热点,因此本研究以3T3-L1脂肪细胞为研究对象,通过添加天然小分子龙血素B(Loureirin B),检测其对脂肪细胞的成脂情况及其影响成脂的机制,进而探究其对脂质代谢的影响,从而为调控猪的脂肪沉积提供理论依据。本研究主要获得以下结果:1、在3T3-L1脂肪细胞增殖期加入80μmol/L的Loureirin B处理24h,CCK-8试剂盒检测细胞活力,结果表明80μmol/L的Loureirin B对3T3-L1脂肪细胞的活力无显著影响;2、龙血素B(80μmol/L)对3T3-L1脂肪细胞的增殖有抑制作用。在3T3-L1脂肪细胞增殖期加入80μmol/L的Loureirin B处理48h-72h,利用EdU染色可发现Loureirin B处理可显著降低细胞的数目(P0.01);RT-PCR检测增殖相关基因的mRNA表达,Western blot检测相关蛋白的表达水平,结果发现Loureirin B处理可显著下调促增殖基因CyclinD、CyclinE的mRNA和蛋白的表达(P0.01),上调抑增殖基因的P53 mRNA水平(P0.05),与增殖有关的ERK信号通路中ERK1/2的磷酸化水平下降(P0.05);流式细胞术检测细胞增殖周期,结果发现Loureirin B处理后,使S期的细胞数目减少,可使细胞的增殖周期阻滞在G2期。3、龙血素B(80μmol/L)显著促进3T3-L1脂肪细胞的成脂与分化。在3T3-L1脂肪细胞的分化期加入80μmol/L的Loureirin B,油红O染色发现与对照组相比Loureirin B能显著促进3T3-L1脂肪细胞内脂滴的合成;RT-PCR和Western blot检测相关基因和蛋白表达水平。结果发现,Loureirin B处理后在mRNA和蛋白水平上,脂合成和脂分解相关基因和蛋白表达量均上升,但脂质合成相关基因的mRNA和蛋白的表达水平上调幅度较高。为了进一步探究Loureirin B促进成脂的机制,我们首先确定了其可能通过GPR120来发挥作用,通过RT-PCR和Western blot结果发现处理组GPR120的mRNA水平和蛋白表达都显著上升(P0.01),加入GPR120的抑制剂AH7614后,细胞内的脂滴明显减少,通过RT-PCR和Western blot得到的结果与表型一致;进一步研究发现,胰岛素信号通路的敏感性增强,促进了GLUT4的转位,进而促进葡萄糖的吸收,最终促进细胞内脂质的合成。综上所述,80μmol/L的天然小分子龙血素B可显著抑制脂肪细胞的增殖,在分化期可显著促进细胞内脂质的沉积,是一种潜在的促进动物体内脂肪沉积、改善肉品质的候选天然小分子。
【学位单位】：西北农林科技大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：S852.2
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
主要符号对照表
文献综述
    第一章 文章综述
        1.1 脂质合成
            1.1.1 脂质合成的途径
        1.2 脂肪细胞分化的分子机制
            1.2.1 脂肪合成相关转录因子
            1.2.2 脂肪细胞分化过程中的PI3K-Akt信号通路
            1.2.3 葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）
        1.3 天然小分子研究进展
            1.3.1 天然小分子
            1.3.2 天然小分子的靶标研究
            1.3.3 天然小分子龙血素B的研究进展
            1.3.4 天然产物及Loureirin B调控脂肪沉积研究现状
试验研究
    第二章 LOUREIRIN B对3T3-L1 脂肪细胞增殖的影响
        前言
        2.1 材料与方法
            2.1.1 细胞
            2.1.2 主要仪器
            2.1.3 试剂
            2.1.4 实验方法
            2.1.5 数据处理
        2.2 结果
            2.2.1 Loureirin B处理3T3-L1脂肪细胞浓度的筛选
            2.2.2 Loureirin B对3T3-L1脂肪细胞增殖的影响
        2.3 讨论
        2.4 小结
    第三章 LOUREIRIN B对3T3-L1脂肪细胞分化的调控作用
        前言
        3.1 材料与方法
            3.1.1 细胞
            3.1.2 主要仪器
            3.1.3 试剂
            3.1.4 实验方法
            3.1.5 数据处理
        3.2 结果与分析
            3.2.1 Loureirin B对3T3-L1脂肪细胞分化的影响
            3.2.2 Loureirin B对3T3-L1脂肪细胞分化相关基因表达的影响
            3.2.3 Loureirin B对3T3-L1脂肪细胞分化相关蛋白表达的影响
        3.3 讨论
        3.4 小结
    第四章 LOUREIRIN B对3T3-L1脂肪细胞分化调控的机制研究
        前言
        4.1 材料与方法
            4.1.1 细胞
            4.1.2 主要仪器
            4.1.3 试剂
            4.1.4 实验方法
            4.1.5 数据处理
        4.2 结果与分析
            4.2.1 Loureirin B依赖于GPR120来调控3T3-L1脂肪细胞的分化
            4.2.2 Loureirin B促进3T3-L1脂肪细胞分化的通路研究
        4.3 讨论
        4.4 小结
结论、创新点与下一步研究计划
    结论
    创新点
    下一步研究计划
参考文献
附录
致谢
作者简介

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本文编号：2887397