基于蛋白质组学的禽多杀性巴氏杆菌重要免疫原性相关蛋白的发掘及功能研究
发布时间：2020-12-05 17:41
禽巴氏杆菌病(Avian pasteurellosis)又称禽霍乱,是由禽多杀性巴氏杆菌引起的主要侵害鸡、火鸡禽类的一种急性、接触性、败血性传染病。临床上感染的病禽主要表现为急性死亡,死亡率极高。早期使用磺胺类、氯霉素等抗生素预防治疗禽巴氏杆菌病有一定效果。但随着抗生素的长期大量使用,一方面导致禽蛋禽肉等禽产品的药物残留,另一方面导致细菌耐药性增强。预防控制本病的最有效途径和发展趋势是免疫预防。禽多杀性巴氏杆菌(Avian pasteurella,Pm)有15种血清型,用不同血清型的巴氏杆菌制备疫苗免疫,发现各血清型之间并不能提供交叉保护。当前我国使用的禽多杀性巴氏杆菌疫苗是灭活疫苗,最好的商业化灭活疫苗对同源血清型菌株感染的免疫保护率不到80%,保护期短。因此,迫切需要提高灭活疫苗的免疫保护效果和免疫保护期,或者研发新型高效的新疫苗,以满足产业发展的需要。部分学者对某些细菌在限铁和非限铁培养进行比较蛋白质组学的比较分析,发现限铁培养的菌液中有大量的免疫原性蛋白,与非限铁培养的菌液相比呈明显的上调表达。基于这样的发现,我们推测禽巴氏杆菌在限铁培养条件下也可能会产生大量的免疫原性相关蛋白...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：111 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
宿主阻止铁吸收的机制Fig.1-1Felimitationduringbacterialinfections
细菌对铁元素的吸收利用包含两个步骤，一是对铁元素的捕获，二是对铁元运输。铁离子捕获方式是由铁基团、血红蛋白和游离铁离子组成的捕获系统(图 基团是细菌分泌的低分子量铁螯合剂，与铁离子结合的亲和力超过转铁蛋白和蛋白。由于这些分子太大，无法通过革兰氏阴性细菌外膜的非选择性孔进行扩此核团的能量依赖转运是通过碳依赖受体介导的。革兰氏阴性细菌的周质缺TP 或离子梯度，这些梯度可以驱动外膜的转运。因此，由 TonB-ExbB-ExbD 系用内膜产生的质子动能的能量介导外膜的转运（Noinaj et al., 2010）。在细胞质物结合蛋白(SBPs)是 ATP 结合盒(ABC)转运蛋白家族的成员，它识别铁素体铁复合物，并最终将该复合物运送到同源的 ABC 转运蛋白。革兰氏阳性细菌也表BPs，但这些蛋白被捆绑在细胞质膜上。在革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌中，当团到达细胞质时，结合的铁离子通过还原为二价铁离子或通过铁质团的酶降解放，最终释放出铁离子作为营养来源。为了脊椎动物产生中性粒细胞明胶酶相脂质运载蛋白(NGAL；也被称为脂脂质运载蛋白或 siderocalin)，它结合并隔离铁蛋白(图 1-2），对抗铁离子介导的铁离子获取。但一些细菌会产生“隐形”的通过化学修饰来逃避 NGAL（Bao et al., 2010）。
图 2-1 限铁环境和普通环境中 Pm 生长曲线Fig. 2-1 Pm growth curves in iron-limited environment and common environment2.4.2 疫苗的制备疫苗无菌检验结果：将制备的两种灭活疫苗无菌接种于 TSA 平板，37℃培养48h，TSA 平板无细菌生长，表明灭活疫苗完全灭活，没有杂菌。疫苗保质期检验结果： 取制备的灭活油乳剂疫苗 4℃放置 12 个月后，无分层现象，外观、性状均无变化，表明灭活疫苗保质期可达 12 月，性状稳定。稳定性检验结果：取制备的灭活油乳剂疫苗疫苗滴于水面上不扩散，经离心后无分层现象，外观、性状均无变化，表明疫苗乳化效果良好。疫苗安全性检测结果：各组鸡均无临床症状和发病死亡情况，接种部位无红肿等炎性症状，三组鸡在第 7d 进行解剖观察，内脏组织无明显的病变；无菌接种脏器组织均无细菌生长，表明所制备的疫苗安全性好。2.4.3 疫苗免疫后抗体监测对免疫后的鸡群，每周采血一次，分离血清。血清经 1:50 稀释后，通过 ELISA
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪巴氏杆菌病的病原检测及耐药性分析[J]. 卢琴,李明波,彭先文,宋忠旭,雷彬,梅书棋. 猪业科学. 2015(04)
[2]禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白单价DNA疫苗及融合DNA疫苗的免疫效果分析[J]. 宫强,张爱国,牛明福,秦翠丽,孙晓菲. 中国兽医科学. 2012(08)
[3]禽多杀性巴氏杆菌脂蛋白E基因的原核表达及其对小鼠的免疫原性[J]. 崔卫涛,胡思顺,王延昭,周晓芬,李自力,肖运才,毕丁仁. 湖北农业科学. 2011(04)
[4]鸭疫里默氏杆菌强、弱菌株外膜蛋白的比较蛋白质组学研究[J]. 刘燕,韦强,鲍国连,季权安. 生物化学与生物物理进展. 2008(06)
[5]血清1和3型多杀性巴氏杆菌铁调控外膜蛋白共同抗原的初步分析[J]. 余旭平,邬栋栋,刘晓宁,胡东建,杜鑫,陈玉银. 畜牧兽医学报. 2008(02)
[6]兔多杀性巴氏杆菌铁调节外膜蛋白的小鼠免疫效果分析[J]. 顾宏伟,陆承平. 中国农业科学. 2007(05)
[7]巴氏杆菌对链霉素和磺胺耐药机制的研究[J]. 金天明,高丰,佟庆彬,武迎红. 畜牧与兽医. 2007(02)
[8]禽多杀性巴氏杆菌C48-1成熟外膜蛋白H重组亚单位疫苗免疫效果的研究[J]. 曹素芳,黄青云. 中国兽医科学. 2006(06)
[9]比较蛋白质组学研究与应用进展[J]. 李鑫. 国际免疫学杂志. 2006(03)
[10]幽门螺杆菌球形休眠体形成的比较蛋白质组学研究[J]. 贾继辉,陈春燕,于修平,郭辉玉,张茂修,周亚滨,赵蔚明,栾怡,齐眉. 中华微生物学和免疫学杂志. 2003(10)
博士论文
[1]猪源多杀性巴氏杆菌的分子流行病学与致病性研究[D]. 汤细彪.华中农业大学 2010
硕士论文
[1]1型鸭疫里默氏杆菌比较蛋白质组学研究及抗体检测方法的建立[D]. 杨依霏.华中农业大学 2012
本文编号：2899837
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：111 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
宿主阻止铁吸收的机制Fig.1-1Felimitationduringbacterialinfections
细菌对铁元素的吸收利用包含两个步骤，一是对铁元素的捕获，二是对铁元运输。铁离子捕获方式是由铁基团、血红蛋白和游离铁离子组成的捕获系统(图 基团是细菌分泌的低分子量铁螯合剂，与铁离子结合的亲和力超过转铁蛋白和蛋白。由于这些分子太大，无法通过革兰氏阴性细菌外膜的非选择性孔进行扩此核团的能量依赖转运是通过碳依赖受体介导的。革兰氏阴性细菌的周质缺TP 或离子梯度，这些梯度可以驱动外膜的转运。因此，由 TonB-ExbB-ExbD 系用内膜产生的质子动能的能量介导外膜的转运（Noinaj et al., 2010）。在细胞质物结合蛋白(SBPs)是 ATP 结合盒(ABC)转运蛋白家族的成员，它识别铁素体铁复合物，并最终将该复合物运送到同源的 ABC 转运蛋白。革兰氏阳性细菌也表BPs，但这些蛋白被捆绑在细胞质膜上。在革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌中，当团到达细胞质时，结合的铁离子通过还原为二价铁离子或通过铁质团的酶降解放，最终释放出铁离子作为营养来源。为了脊椎动物产生中性粒细胞明胶酶相脂质运载蛋白(NGAL；也被称为脂脂质运载蛋白或 siderocalin)，它结合并隔离铁蛋白(图 1-2），对抗铁离子介导的铁离子获取。但一些细菌会产生“隐形”的通过化学修饰来逃避 NGAL（Bao et al., 2010）。
图 2-1 限铁环境和普通环境中 Pm 生长曲线Fig. 2-1 Pm growth curves in iron-limited environment and common environment2.4.2 疫苗的制备疫苗无菌检验结果：将制备的两种灭活疫苗无菌接种于 TSA 平板，37℃培养48h，TSA 平板无细菌生长，表明灭活疫苗完全灭活，没有杂菌。疫苗保质期检验结果： 取制备的灭活油乳剂疫苗 4℃放置 12 个月后，无分层现象，外观、性状均无变化，表明灭活疫苗保质期可达 12 月，性状稳定。稳定性检验结果：取制备的灭活油乳剂疫苗疫苗滴于水面上不扩散，经离心后无分层现象，外观、性状均无变化，表明疫苗乳化效果良好。疫苗安全性检测结果：各组鸡均无临床症状和发病死亡情况，接种部位无红肿等炎性症状，三组鸡在第 7d 进行解剖观察，内脏组织无明显的病变；无菌接种脏器组织均无细菌生长，表明所制备的疫苗安全性好。2.4.3 疫苗免疫后抗体监测对免疫后的鸡群，每周采血一次，分离血清。血清经 1:50 稀释后，通过 ELISA
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪巴氏杆菌病的病原检测及耐药性分析[J]. 卢琴,李明波,彭先文,宋忠旭,雷彬,梅书棋. 猪业科学. 2015(04)
[2]禽多杀性巴氏杆菌外膜蛋白单价DNA疫苗及融合DNA疫苗的免疫效果分析[J]. 宫强,张爱国,牛明福,秦翠丽,孙晓菲. 中国兽医科学. 2012(08)
[3]禽多杀性巴氏杆菌脂蛋白E基因的原核表达及其对小鼠的免疫原性[J]. 崔卫涛,胡思顺,王延昭,周晓芬,李自力,肖运才,毕丁仁. 湖北农业科学. 2011(04)
[4]鸭疫里默氏杆菌强、弱菌株外膜蛋白的比较蛋白质组学研究[J]. 刘燕,韦强,鲍国连,季权安. 生物化学与生物物理进展. 2008(06)
[5]血清1和3型多杀性巴氏杆菌铁调控外膜蛋白共同抗原的初步分析[J]. 余旭平,邬栋栋,刘晓宁,胡东建,杜鑫,陈玉银. 畜牧兽医学报. 2008(02)
[6]兔多杀性巴氏杆菌铁调节外膜蛋白的小鼠免疫效果分析[J]. 顾宏伟,陆承平. 中国农业科学. 2007(05)
[7]巴氏杆菌对链霉素和磺胺耐药机制的研究[J]. 金天明,高丰,佟庆彬,武迎红. 畜牧与兽医. 2007(02)
[8]禽多杀性巴氏杆菌C48-1成熟外膜蛋白H重组亚单位疫苗免疫效果的研究[J]. 曹素芳,黄青云. 中国兽医科学. 2006(06)
[9]比较蛋白质组学研究与应用进展[J]. 李鑫. 国际免疫学杂志. 2006(03)
[10]幽门螺杆菌球形休眠体形成的比较蛋白质组学研究[J]. 贾继辉,陈春燕,于修平,郭辉玉,张茂修,周亚滨,赵蔚明,栾怡,齐眉. 中华微生物学和免疫学杂志. 2003(10)
博士论文
[1]猪源多杀性巴氏杆菌的分子流行病学与致病性研究[D]. 汤细彪.华中农业大学 2010
硕士论文
[1]1型鸭疫里默氏杆菌比较蛋白质组学研究及抗体检测方法的建立[D]. 杨依霏.华中农业大学 2012
本文编号：2899837
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