2型猪链球菌05ZYH33表面蛋白SSU05 0 630的功能研究

发布时间：2020-12-06 21:27

　　猪链球菌（Streptococcus suis）是一种重要的人兽共患病病原菌,目前共分为29个血清型,其中2型猪链球菌（S.suis serotype 2,SS2）的致病性最强,可导致猪和人的多种疾病和死亡,给养猪业和人类生命造成严重威胁,引起国内外学者的广泛关注。本文对2型猪链球菌05ZYH33表面蛋白糖苷水解酶SSU05₀630的功能进行了系统研究:通过SSU05₀630结构域分析、基因克隆、蛋白表达和纯化,获得了SsCBM、SsGH16、SsGH20和SsCBM+GH16四个结构域的蛋白,利用上述其中3种蛋白分别免疫日本大耳兔,制备了SsCBM、SsGH16和SsGH20结构域蛋白的多克隆抗体,抗体效价均达到了1:204800;应用信息肽GE9诱导片段转化和同源重组方法,构建了ssu05₀630基因缺失菌株,通过测定生长曲线和小鼠实验,对05ZYH33野生菌株（WT）和ssu05₀630^Δ基因缺失株的生长特性和毒力进行了比较。结果显示,二者菌落形态、生长曲线及对小鼠致病力... 

【文章来源】：黑龙江八一农垦大学黑龙江省

【文章页数】：77 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

猪链球菌的显微镜观察

.3 宿主糖蛋白及病原菌糖苷水解酶糖蛋白是由蛋白质和糖或糖的衍生物所组成的一类复杂蛋白，是蛋白质翻译后修饰常见形式之一，在哺乳动物体内含量丰富，广泛存在于细胞表面、血液和体液中，参胞定位、吞饮、识别、迁移、信息传递、免疫、受体、酶调节机制等重要生命过程。体内，糖蛋白和糖脂存在于细胞外表面上，有助于形成包裹细胞的复杂的富含碳水化的糖萼，促进细胞和细胞之间的相互作用、细胞信号传导和物理保护等关键功能[72]。发现，糖蛋白不仅是细胞的一种结构组分，具有支持、保护、润滑机体的功能，而且催化、细胞和分子间识别，以及生物体的抗冻等作用密切相关[73]。根据糖基化的位点的不同，糖蛋白的糖链分为 N-聚糖（Asn 位点）和 O-聚糖 （Ser/T点）。其中 N-聚糖糖基化最普遍，其特征是五糖核心结构，根据核心结构外分支的糖成不同，分为高甘露糖型、复杂型和介于两者之间的杂合型（图 1-2）。

6）每孔中加入 100 μLTMB 底物显色液。37℃避光孵育 10 min。7）每孔加入 50 μL 2 M 硫酸终止反应。8）酶标仪读取 OD450 nm。.3 结果.3.1 SSU05_0630 结构域分析及克隆策略采用肺炎链球菌的StrH氨基酸序列，通过BLAST搜索SS2 05ZYH33基因组注释蛋示其同源蛋白只有一个，编号 SSU05_0630。对 SSU05_0630 进行结构域分析，发现其有 4 个结构域：2 个结合结构域（carbohydrate binding module）CBM1 和 CBM2，2 个水解酶催化结构域，分别属于糖苷水解酶家族 GH16 和 GH20（图 2-1）。为了分别研究不同结构域的功能，我们对 4 个结构域根据功能进行了分段克隆和表体如图 2-1 所示，为保证结构域完整性，每个克隆均向两端进行了延长，分别命名sCBM、SsGH16、SsGH20 和 SsCBM+GH16。

【参考文献】：
期刊论文
[1]利用信息肽诱导和Cre/LoxP系统构建猪链球菌基因缺失株[J]. 刘冉,陈福广,陈平,黄萌萌,朱金鲁,谢芳,孟庆文,刘思国,刘建华,张跃灵.  中国预防兽医学报. 2019(02)
[2]猪2型链球菌病疫苗的研究进展[J]. 王斌,聂建,李旭廷.  今日养猪业. 2012(01)
[3]猪链球菌2型分选酶srtBCD基因敲除株的构建及其生物学特性分析[J]. 陈红娜,廖辉,王长军,潘秀珍,唐家琪.  微生物学报. 2011(03)
[4]猪链球菌2型毒力相关因子的研究进展[J]. 郭莉莉,徐成刚,张建民,李静怡,陈济铛,廖明.  中国畜牧兽医. 2010(01)

硕士论文
[1]生物净化技术用于重建SPF级日本大耳兔生产群[D]. 黄瑾.上海交通大学 2014



本文编号：2902056