河北部分区域奶牛乳房炎主要致病菌鉴定及多重PCR检测方法的建立
发布时间：2020-12-12 08:55
奶牛乳房炎是奶牛养殖过程中的常见疾病之一,并且在有奶牛饲养的地区均有此病的发生。该病的发生与饲养管理和环境因素密切相关,一旦发病,难以控制其传播或从根本上消除。本研究根据河北DHI数据监测奶牛体细胞水平,对邯郸、衡水、石家庄、沧州、保定、廊坊、张家口等七个地区规模化奶牛养殖场采集的175份奶样进行细菌分离培养、形态观察、生化试验等,从而对所分离的细菌进行鉴定。结果显示,从175份奶样中分离出了4种主要致病菌。其中,金黄色葡萄球菌有93株,占53.1%;无乳链球菌有85株,占48.6%;大肠杆菌共112株,占64%;绿脓杆菌共28株,占16%。在检出的奶样中大部分表现为金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和大肠杆菌的混合感染,并且检出的28株绿脓杆菌均是由张家口地区和石家庄地区的奶样中分离得到,且其中的12株为单独感染。本试验根据引起奶牛乳房炎主要致病菌金黄色葡萄球菌的nuc基因、无乳链球菌的ef-tu基因、大肠杆菌的phoA基因和绿脓杆菌的eta基因保守序列设计并合成4对特异性引物,所扩增目的片段的大小分别为920bp、515bp、268bp和126bp。通过对四种细菌的单一PCR检测法进行退火...
【文章来源】：河北农业大学河北省
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
麦康凯琼脂培养基Figure3MacconkeyAgarmedium
3 结果与分析3.1 病原菌的分离鉴定3.1.1 病原菌分离培养结果从 175 份奶样中分离出 4 种主要致病菌。其中金黄色葡萄球菌 93 株，占 53.1%；无乳链球菌 85 株，占 48.6%；大肠杆菌 112 株，占 64%；绿脓杆菌 28 株，占 16%。将初步鉴定的疑似金黄色葡萄球菌的菌液接种于甘露醇高盐琼脂和 B-P 琼脂上，在甘露醇高盐琼脂上可见金黄色葡萄球菌由于能够利用甘露醇产酸使酚红由红色变为黄色；在 B-P 琼脂培养基上可见有黑色菌落生长且菌落周围有浑浊带；将疑似大肠杆菌的菌液接种于麦康凯琼脂培养基可见有粉红色菌落生长，同时将菌液接种于伊红美蓝琼脂培养基可见菌落有金属光泽；将疑似无乳链球菌的菌液接种于血琼脂培养基可见乳白色、圆形的小菌落；而绿脓杆菌在十六烷基三甲基溴化铵琼脂培养基上生长良好，形成绿色的菌落。结果见图 1、2、3、4、5、6。
3 结果与分析3.1 病原菌的分离鉴定3.1.1 病原菌分离培养结果从 175 份奶样中分离出 4 种主要致病菌。其中金黄色葡萄球菌 93 株，占 53.1%；无乳链球菌 85 株，占 48.6%；大肠杆菌 112 株，占 64%；绿脓杆菌 28 株，占 16%。将初步鉴定的疑似金黄色葡萄球菌的菌液接种于甘露醇高盐琼脂和 B-P 琼脂上，在甘露醇高盐琼脂上可见金黄色葡萄球菌由于能够利用甘露醇产酸使酚红由红色变为黄色；在 B-P 琼脂培养基上可见有黑色菌落生长且菌落周围有浑浊带；将疑似大肠杆菌的菌液接种于麦康凯琼脂培养基可见有粉红色菌落生长，同时将菌液接种于伊红美蓝琼脂培养基可见菌落有金属光泽；将疑似无乳链球菌的菌液接种于血琼脂培养基可见乳白色、圆形的小菌落；而绿脓杆菌在十六烷基三甲基溴化铵琼脂培养基上生长良好，形成绿色的菌落。结果见图 1、2、3、4、5、6。
【参考文献】：
期刊论文
[1]乳清急性期蛋白、乳酶作为奶牛隐性乳腺炎诊断指标的研究[J]. 薛永康,闫磊,张震,赵玉玺,虎啸,朱邯豫,王新庄. 中国兽医学报. 2018(08)
[2]奶牛乳房炎的综合防治技术[J]. 毕秀军,王维浩,吴连华. 山东畜牧兽医. 2018(02)
[3]快速检测奶牛乳房炎四种病原菌的多重PCR方法的建立及应用[J]. 丁天翊,潘阳阳,何翃闳,赵凌,崔燕,余四九. 中国兽医科学. 2018(01)
[4]奶牛隐性乳房炎研究进展[J]. 居自远,徐小洪,黄炳旭,付守鹏,钱晶. 安徽农业科学. 2017(32)
[5]多重PCR与细菌培养法检测牛乳中病原菌的对比研究[J]. 武守艳,董春光,韩文儒,杨丽华,陈剑波,赵瑞生,夏艳婷,韩一超. 黑龙江畜牧兽医. 2017(22)
[6]中草药防治奶牛乳房炎的研究进展[J]. 何斌,陈洁,金尔光,杨文海,况辉,姚艳丰,陈夏冰,邵志勇,周木清,华娟,彭精明. 中国兽药杂志. 2016(05)
[7]中国北方奶牛金葡菌乳房炎感染现状及耐药性和流行类型研究进展[J]. 王晓,俞英. 畜牧兽医学报. 2015(09)
[8]11种(株)食源性细菌基因芯片检测方法的建立[J]. 高兴,辛文文,高姗,康琳,王景林. 生物技术通报. 2013 (12)
[9]中草药在奶牛乳房炎防治中的应用[J]. 梁凤华. 畜牧兽医科技信息. 2013(01)
[10]奶牛乳房炎的研究进展[J]. 毕海林,唐达,唐建华. 黑龙江畜牧兽医. 2012(21)
博士论文
[1]金黄色葡萄球菌耐热核酸酶的功能鉴定及表达调控[D]. 胡瑜.上海交通大学 2013
硕士论文
[1]四种猪冠状病毒多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用[D]. 杨艳楠.吉林大学 2018
[2]山东某规模化奶牛场乳房炎流行病学调查[D]. 韩书娟.山东农业大学 2017
[3]奶山羊乳房炎病原菌分离鉴定及多重PCR检测方法建立[D]. 谢晓艳.西北农林科技大学 2017
[4]奶水牛乳房炎致病菌的分离鉴定及多重PCR检测方法的建立[D]. 马麟.广西大学 2015
[5]河北省不同地区奶牛乳房炎主要病原菌的分离鉴定和耐药性研究[D]. 张月.河北农业大学 2015
[6]多重PCR检测牛肉中沙门氏菌、单增李斯特菌和大肠杆菌O157：H7的研究[D]. 宋东晓.山东农业大学 2014
[7]奶牛链球菌性乳房炎可视化LAMP检测方法的建立及应用[D]. 贺婷.广西大学 2014
[8]奶牛乳房炎致病菌分离鉴定及快速诊断试剂盒的研发与应用[D]. 陈亚明.广西大学 2014
[9]六种牛源致病性细菌多重PCR检测方法的建立[D]. 刘晓丹.东北农业大学 2013
[10]奶牛乳房炎病原菌分离鉴定及其多重PCR检测方法的建立[D]. 聂培.广西大学 2013
本文编号：2912235
【文章来源】：河北农业大学河北省
【文章页数】：57 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
麦康凯琼脂培养基Figure3MacconkeyAgarmedium
3 结果与分析3.1 病原菌的分离鉴定3.1.1 病原菌分离培养结果从 175 份奶样中分离出 4 种主要致病菌。其中金黄色葡萄球菌 93 株，占 53.1%；无乳链球菌 85 株，占 48.6%；大肠杆菌 112 株，占 64%；绿脓杆菌 28 株，占 16%。将初步鉴定的疑似金黄色葡萄球菌的菌液接种于甘露醇高盐琼脂和 B-P 琼脂上，在甘露醇高盐琼脂上可见金黄色葡萄球菌由于能够利用甘露醇产酸使酚红由红色变为黄色；在 B-P 琼脂培养基上可见有黑色菌落生长且菌落周围有浑浊带；将疑似大肠杆菌的菌液接种于麦康凯琼脂培养基可见有粉红色菌落生长，同时将菌液接种于伊红美蓝琼脂培养基可见菌落有金属光泽；将疑似无乳链球菌的菌液接种于血琼脂培养基可见乳白色、圆形的小菌落；而绿脓杆菌在十六烷基三甲基溴化铵琼脂培养基上生长良好，形成绿色的菌落。结果见图 1、2、3、4、5、6。
3 结果与分析3.1 病原菌的分离鉴定3.1.1 病原菌分离培养结果从 175 份奶样中分离出 4 种主要致病菌。其中金黄色葡萄球菌 93 株，占 53.1%；无乳链球菌 85 株，占 48.6%；大肠杆菌 112 株，占 64%；绿脓杆菌 28 株，占 16%。将初步鉴定的疑似金黄色葡萄球菌的菌液接种于甘露醇高盐琼脂和 B-P 琼脂上，在甘露醇高盐琼脂上可见金黄色葡萄球菌由于能够利用甘露醇产酸使酚红由红色变为黄色；在 B-P 琼脂培养基上可见有黑色菌落生长且菌落周围有浑浊带；将疑似大肠杆菌的菌液接种于麦康凯琼脂培养基可见有粉红色菌落生长，同时将菌液接种于伊红美蓝琼脂培养基可见菌落有金属光泽；将疑似无乳链球菌的菌液接种于血琼脂培养基可见乳白色、圆形的小菌落；而绿脓杆菌在十六烷基三甲基溴化铵琼脂培养基上生长良好，形成绿色的菌落。结果见图 1、2、3、4、5、6。
【参考文献】：
期刊论文
[1]乳清急性期蛋白、乳酶作为奶牛隐性乳腺炎诊断指标的研究[J]. 薛永康,闫磊,张震,赵玉玺,虎啸,朱邯豫,王新庄. 中国兽医学报. 2018(08)
[2]奶牛乳房炎的综合防治技术[J]. 毕秀军,王维浩,吴连华. 山东畜牧兽医. 2018(02)
[3]快速检测奶牛乳房炎四种病原菌的多重PCR方法的建立及应用[J]. 丁天翊,潘阳阳,何翃闳,赵凌,崔燕,余四九. 中国兽医科学. 2018(01)
[4]奶牛隐性乳房炎研究进展[J]. 居自远,徐小洪,黄炳旭,付守鹏,钱晶. 安徽农业科学. 2017(32)
[5]多重PCR与细菌培养法检测牛乳中病原菌的对比研究[J]. 武守艳,董春光,韩文儒,杨丽华,陈剑波,赵瑞生,夏艳婷,韩一超. 黑龙江畜牧兽医. 2017(22)
[6]中草药防治奶牛乳房炎的研究进展[J]. 何斌,陈洁,金尔光,杨文海,况辉,姚艳丰,陈夏冰,邵志勇,周木清,华娟,彭精明. 中国兽药杂志. 2016(05)
[7]中国北方奶牛金葡菌乳房炎感染现状及耐药性和流行类型研究进展[J]. 王晓,俞英. 畜牧兽医学报. 2015(09)
[8]11种(株)食源性细菌基因芯片检测方法的建立[J]. 高兴,辛文文,高姗,康琳,王景林. 生物技术通报. 2013 (12)
[9]中草药在奶牛乳房炎防治中的应用[J]. 梁凤华. 畜牧兽医科技信息. 2013(01)
[10]奶牛乳房炎的研究进展[J]. 毕海林,唐达,唐建华. 黑龙江畜牧兽医. 2012(21)
博士论文
[1]金黄色葡萄球菌耐热核酸酶的功能鉴定及表达调控[D]. 胡瑜.上海交通大学 2013
硕士论文
[1]四种猪冠状病毒多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用[D]. 杨艳楠.吉林大学 2018
[2]山东某规模化奶牛场乳房炎流行病学调查[D]. 韩书娟.山东农业大学 2017
[3]奶山羊乳房炎病原菌分离鉴定及多重PCR检测方法建立[D]. 谢晓艳.西北农林科技大学 2017
[4]奶水牛乳房炎致病菌的分离鉴定及多重PCR检测方法的建立[D]. 马麟.广西大学 2015
[5]河北省不同地区奶牛乳房炎主要病原菌的分离鉴定和耐药性研究[D]. 张月.河北农业大学 2015
[6]多重PCR检测牛肉中沙门氏菌、单增李斯特菌和大肠杆菌O157：H7的研究[D]. 宋东晓.山东农业大学 2014
[7]奶牛链球菌性乳房炎可视化LAMP检测方法的建立及应用[D]. 贺婷.广西大学 2014
[8]奶牛乳房炎致病菌分离鉴定及快速诊断试剂盒的研发与应用[D]. 陈亚明.广西大学 2014
[9]六种牛源致病性细菌多重PCR检测方法的建立[D]. 刘晓丹.东北农业大学 2013
[10]奶牛乳房炎病原菌分离鉴定及其多重PCR检测方法的建立[D]. 聂培.广西大学 2013
本文编号：2912235
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