利用转基因鼠模型验证猪的MYOZ1/MYF6启动子上调肌肉组织中猪的PPAR-γ2/MYOD基因的表达
发布时间：2020-12-11 16:51
转基因动物是将外源的目的基因导入宿主细胞中,使外源基因稳定的整合在宿主基因组中,并且可以随着转基因动物的传代稳定的将外源基因传给后代。通过转基因动物模型,研究外源基因在活体中的表达情况,进而获得人们理想的性状。本研究将猪肌肉特异性重组表达质粒p GL3-Myoz1-PPAR-γ2his-Basic和p SV40-Myf6-Myo DEGFP-N1线性化后利用显微注射技术获得PPAR-γ2和Myo D转基因鼠,从核酸水平、蛋白水平及活体水平等方面研究外源基因拷贝数、启动子组织特异性、目的性状表型等内容,以期为转基因猪提供有用的启动子。主要研究成果如下:1、利用PCR技术成功鉴定出PPAR-γ2和Myo D转基因阳性鼠及外源基因的拷贝数,结果表明外源基因可以稳定地遗传给后代。采用实时荧光定量PCR、免疫组化和Western blot等技术证实猪肌肉组织特异性启动子Myoz1和Myf6可以上调PPAR-γ2（p<0.01）和Myo D（p>0.05）基因的表达,并且上调PPAR-γ2下游靶基因脂肪酸结合蛋白（fatty acid-binding protein 4,FABP4）和...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
直接或间接调控PPARγ的信号因子（引自(Fernyhough2007)）
第三章 PPAR-γ2 转基因鼠的研究结果与分析1 PPAR-γ2 阳性转基因鼠的鉴定将实验室保存的 PPAR-γ2 质粒线性化后，线性化的质粒见图 3-1A，利用显微注射技术制备转基因鼠。原代的转基因鼠首先与野生型鼠交配，获得的 F1 代转基因鼠，F1 代阳性转基因公母鼠相互交配获得 F2 代，同样的交配方式直到获得 F3 代转基因鼠。利用 PCR 方法从 PPAR-γ2 转基因后代鼠基因组 DNA 上扩增外源全长片段，初步鉴定阳性转基因鼠，PCR 扩增鉴定的结果见图 3-1B。2-22 泳道分别为 21 只转基因后代鼠，其中 2、4、7-9、12-17、19 泳道有目的条带，则为阳性转基因鼠，其余泳道没有目的条带则为阴性鼠。但是目的条带的亮度并不完全相同，这可能是由于有的鼠为纯合子有的鼠为杂合子，并且外源基因在不同转基因后代鼠基因组中的拷贝数也有所不同。
图 3-2 小鼠单拷贝基因 Pthlh 部分序列 PCR 电泳图泳道 M:DL2000；泳道 1-6:单拷贝基因 Pthlh 扩增片段Fig.3-2 PCR Products of mouse single copy gene called PthlhLaneM:DL2000；Lane1-6:Amplified subsequence fragments of Pthlh
【参考文献】：
期刊论文
[1]反向疫苗学:后基因组时代疫苗研究新途径[J]. 胡永浩,沈正达. 中国兽医学报. 2004(04)
[2]基因工程技术在反刍动物上的应用研究[J]. 赵学军,刘建新,吴跃明. 中国饲料. 2004(11)
硕士论文
[1]猪骨骼肌特异性表达基因myoz1/tnnc2启动子的克隆及功能验证[D]. 尚杨杨.华中农业大学 2013
[2]猪肌肉/肝脏特异性表达MyoD/BGL1载体构建及转基因小鼠的研究[D]. 周鹏.华中农业大学 2013
[3]五指山猪KIT基因拷贝数检测暨猪PSME1基因与免疫性状关系的研究[D]. 牛玉娜.华中农业大学 2007
本文编号：2910886
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：80 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
直接或间接调控PPARγ的信号因子（引自(Fernyhough2007)）
第三章 PPAR-γ2 转基因鼠的研究结果与分析1 PPAR-γ2 阳性转基因鼠的鉴定将实验室保存的 PPAR-γ2 质粒线性化后，线性化的质粒见图 3-1A，利用显微注射技术制备转基因鼠。原代的转基因鼠首先与野生型鼠交配，获得的 F1 代转基因鼠，F1 代阳性转基因公母鼠相互交配获得 F2 代，同样的交配方式直到获得 F3 代转基因鼠。利用 PCR 方法从 PPAR-γ2 转基因后代鼠基因组 DNA 上扩增外源全长片段，初步鉴定阳性转基因鼠，PCR 扩增鉴定的结果见图 3-1B。2-22 泳道分别为 21 只转基因后代鼠，其中 2、4、7-9、12-17、19 泳道有目的条带，则为阳性转基因鼠，其余泳道没有目的条带则为阴性鼠。但是目的条带的亮度并不完全相同，这可能是由于有的鼠为纯合子有的鼠为杂合子，并且外源基因在不同转基因后代鼠基因组中的拷贝数也有所不同。
图 3-2 小鼠单拷贝基因 Pthlh 部分序列 PCR 电泳图泳道 M:DL2000；泳道 1-6:单拷贝基因 Pthlh 扩增片段Fig.3-2 PCR Products of mouse single copy gene called PthlhLaneM:DL2000；Lane1-6:Amplified subsequence fragments of Pthlh
【参考文献】：
期刊论文
[1]反向疫苗学:后基因组时代疫苗研究新途径[J]. 胡永浩,沈正达. 中国兽医学报. 2004(04)
[2]基因工程技术在反刍动物上的应用研究[J]. 赵学军,刘建新,吴跃明. 中国饲料. 2004(11)
硕士论文
[1]猪骨骼肌特异性表达基因myoz1/tnnc2启动子的克隆及功能验证[D]. 尚杨杨.华中农业大学 2013
[2]猪肌肉/肝脏特异性表达MyoD/BGL1载体构建及转基因小鼠的研究[D]. 周鹏.华中农业大学 2013
[3]五指山猪KIT基因拷贝数检测暨猪PSME1基因与免疫性状关系的研究[D]. 牛玉娜.华中农业大学 2007
本文编号：2910886
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/2910886.html
最近更新
教材专著
