四黄止痢复方中药提取物抗禽致病性大肠杆菌作用效果研究
发布时间：2020-12-12 18:42
目的为了获得四黄止痢复方中药提取物（Extract from compound Chinese medicine Sihuangzhili,ECCS）、获悉ECCS抗禽致病性大肠杆菌（Avian pathogenic Escherichia coli,APEC）作用机制及其治疗效果,本研究开展了建立ECCS多组分HPLC检测方法、优化其制备工艺参数、研究其体外抗APEC-O2的活性、对毒力基因的影响及体内治疗效果系列实验,为ECCS的进一步的研究提供实验依据。方法以四黄止痢复方中药（黄芩、黄柏、大黄、黄连、板蓝根、甘草）为原料,甲醇为提取溶剂,用浸渍法提取,设计浸渍温度、浸渍时间、液料比、甲醇体积分数4个因素为自变量,黄芩苷、盐酸小檗碱含量及干膏率综合评分为因变量,采用高效液相色谱法（HPLC）测定含量。以单因素试验结果为基础,用Design-expert软件设计三因素三水平,响应面法建立数学模型,得到最优制备工艺参数,制备ECCS;利用肉汤二倍稀释法测定ECCS对APEC-O2菌的最小抑菌浓度（MIC）;吸光光度法检测ECCS对细菌生长曲线...
【文章来源】：锦州医科大学辽宁省
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
专属性试验色谱图
图 2 盐酸小檗碱、黄芩苷标准曲线（三）单因素实验由图 3a 所示，综合评分在温度为 25℃时达到峰值，但随浸渍温度的不断升高，综合评分也逐渐下降，到 100℃时达到最低，所以最佳浸渍温度选为 25℃。由图 3b 所示，综合评分从 30 min 到 120 min 时显著升高，120 min 时到达最大值，超过 120 min 时开始降低。可能是随着浸渍时间的增加，盐酸小檗碱和黄芩苷中的水溶性杂质的溶出增加，将有效成分分子包裹起来，阻止其扩散，导致其提取率下降。为了试验精确，选取综合评分最高点 120 min 以及其两侧 90 min 和150 min 三个水平进行响应面优化试验。由图 3c 可知，料液比在 1:200 至 1:250 时，综合评分显著提高，但在 1:250到 1:350 时升高缓慢，当料液比超过 1:350 后综合评分开始降低。可能是料液比较小时，黄芩苷、盐酸小檗碱不能完全溶出，达到一定料液比后完全溶出，但若
图 3 单因素实验结果图注：浸渍温度（a）、浸渍时间（b）、料液比（c）、甲醇体积分数（d）对综合评分的影响（四）响应面法优化1、响应面优化试验设计根据单因素试验结果，将浸渍温度固定为 25℃，其它因素选取合适的水平，展开响应面试验。具体因素水平见表 13。表 13 响应面分析因素水平因素 浸渍时间（A）/min 甲醇体积分数（B）/% 料液比（C）/（g/mL）-1 90 65 1︰3000 120 75 1︰3501 150 85 1︰400
【参考文献】：
期刊论文
[1]苦参功劳颗粒治疗鸡大肠杆菌病的Ⅲ期临床试验[J]. 高艳艳,高富红,张晓会,刘兴金. 中国动物保健. 2018(10)
[2]大肠杆菌毒力因子及耐药机制研究进展[J]. 赫鸣睿. 现代畜牧科技. 2018(09)
[3]盐酸小檗碱提取方法研究进展[J]. 韩宁娟,方欢乐,牛睿,葛维娟,刘荣利. 生物化工. 2018(02)
[4]车前子黄酮的响应面法优化微波提取及其对鸡抗氧化能力的影响[J]. 丘富安,张建龙,丁育诗,任喆,李益坤,董星,李健,李烨瑶,秦韬,黄一帆. 中国兽医科学. 2017(10)
[5]鸡大肠杆菌病诊断与防治[J]. 贾新利,项广财. 当代畜牧. 2017(23)
[6]四黄止痢颗粒中几种有效成分的薄层鉴别研究[J]. 贾纪萍,熊玥,宋慧敏,李芳,李正雄,陈晓兰. 中国畜牧兽医. 2017(04)
[7]靛玉红对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抗菌作用[J]. 林健,林志立,陈良善,陈纯真,林芳芳. 九江学院学报(自然科学版). 2017(01)
[8]中药饮片对多重抗生素耐药细菌的抑菌作用[J]. 黄琨明,杨志高,刘爱云,郭惠东,宁小玲. 内蒙古中医药. 2016(13)
[9]细菌生长曲线测定实验方法的研究[J]. 朱艳蕾. 微生物学杂志. 2016(05)
[10]黄连的药理作用及现代研究进展[J]. 尹丽丽. 中医临床研究. 2016(28)
博士论文
[1]复方中药对鸡大肠杆菌病的治疗效果及其机理研究[D]. 张瀚元.东北农业大学 2018
[2]大黄素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体内、外抗菌作用及机制研究[D]. 刘明.第三军医大学 2015
硕士论文
[1]补骨脂乙素抗菌机制研究[D]. 周娟.河南大学 2016
[2]黄连水提物对痢疾杆菌的抑菌机制研究[D]. 黄燕飞.安徽农业大学 2016
[3]马齿苋提取物对产ESBLs大肠杆菌体外抑菌作用及抑菌机理的研究[D]. 孙燕杰.广西大学 2016
[4]苏鲁部分地区禽致病性大肠杆菌的分离及2个O78分离株致病性的研究[D]. 曹春光.扬州大学 2015
[5]抗S.suis BF中药的筛选及大黄素对毒力基因和luxS的影响[D]. 韩强.东北农业大学 2014
[6]甘草根提取物对番茄枯萎病菌生物活性及抑菌机理的研究[D]. 孙红霞.山西农业大学 2014
[7]APEC毒力岛基因irp2、fyua缺失对其毒力影响的研究[D]. 邵颖.安徽农业大学 2014
[8]黄芩醇提物抑菌成分的初步确定及对黑根霉抑菌机理研究[D]. 刘影.南京师范大学 2014
[9]禽病原性大肠杆菌ompA、ompT基因和肠炎沙门氏菌ompA、pgtE基因突变株的构建及其生物学特性研究[D]. 周业菲.扬州大学 2013
[10]甘草提取物及有效成分的抗菌活性研究[D]. 刘一.延边大学 2013
本文编号：2913082
【文章来源】：锦州医科大学辽宁省
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
专属性试验色谱图
图 2 盐酸小檗碱、黄芩苷标准曲线（三）单因素实验由图 3a 所示，综合评分在温度为 25℃时达到峰值，但随浸渍温度的不断升高，综合评分也逐渐下降，到 100℃时达到最低，所以最佳浸渍温度选为 25℃。由图 3b 所示，综合评分从 30 min 到 120 min 时显著升高，120 min 时到达最大值，超过 120 min 时开始降低。可能是随着浸渍时间的增加，盐酸小檗碱和黄芩苷中的水溶性杂质的溶出增加，将有效成分分子包裹起来，阻止其扩散，导致其提取率下降。为了试验精确，选取综合评分最高点 120 min 以及其两侧 90 min 和150 min 三个水平进行响应面优化试验。由图 3c 可知，料液比在 1:200 至 1:250 时，综合评分显著提高，但在 1:250到 1:350 时升高缓慢，当料液比超过 1:350 后综合评分开始降低。可能是料液比较小时，黄芩苷、盐酸小檗碱不能完全溶出，达到一定料液比后完全溶出，但若
图 3 单因素实验结果图注：浸渍温度（a）、浸渍时间（b）、料液比（c）、甲醇体积分数（d）对综合评分的影响（四）响应面法优化1、响应面优化试验设计根据单因素试验结果，将浸渍温度固定为 25℃，其它因素选取合适的水平，展开响应面试验。具体因素水平见表 13。表 13 响应面分析因素水平因素 浸渍时间（A）/min 甲醇体积分数（B）/% 料液比（C）/（g/mL）-1 90 65 1︰3000 120 75 1︰3501 150 85 1︰400
【参考文献】：
期刊论文
[1]苦参功劳颗粒治疗鸡大肠杆菌病的Ⅲ期临床试验[J]. 高艳艳,高富红,张晓会,刘兴金. 中国动物保健. 2018(10)
[2]大肠杆菌毒力因子及耐药机制研究进展[J]. 赫鸣睿. 现代畜牧科技. 2018(09)
[3]盐酸小檗碱提取方法研究进展[J]. 韩宁娟,方欢乐,牛睿,葛维娟,刘荣利. 生物化工. 2018(02)
[4]车前子黄酮的响应面法优化微波提取及其对鸡抗氧化能力的影响[J]. 丘富安,张建龙,丁育诗,任喆,李益坤,董星,李健,李烨瑶,秦韬,黄一帆. 中国兽医科学. 2017(10)
[5]鸡大肠杆菌病诊断与防治[J]. 贾新利,项广财. 当代畜牧. 2017(23)
[6]四黄止痢颗粒中几种有效成分的薄层鉴别研究[J]. 贾纪萍,熊玥,宋慧敏,李芳,李正雄,陈晓兰. 中国畜牧兽医. 2017(04)
[7]靛玉红对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抗菌作用[J]. 林健,林志立,陈良善,陈纯真,林芳芳. 九江学院学报(自然科学版). 2017(01)
[8]中药饮片对多重抗生素耐药细菌的抑菌作用[J]. 黄琨明,杨志高,刘爱云,郭惠东,宁小玲. 内蒙古中医药. 2016(13)
[9]细菌生长曲线测定实验方法的研究[J]. 朱艳蕾. 微生物学杂志. 2016(05)
[10]黄连的药理作用及现代研究进展[J]. 尹丽丽. 中医临床研究. 2016(28)
博士论文
[1]复方中药对鸡大肠杆菌病的治疗效果及其机理研究[D]. 张瀚元.东北农业大学 2018
[2]大黄素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的体内、外抗菌作用及机制研究[D]. 刘明.第三军医大学 2015
硕士论文
[1]补骨脂乙素抗菌机制研究[D]. 周娟.河南大学 2016
[2]黄连水提物对痢疾杆菌的抑菌机制研究[D]. 黄燕飞.安徽农业大学 2016
[3]马齿苋提取物对产ESBLs大肠杆菌体外抑菌作用及抑菌机理的研究[D]. 孙燕杰.广西大学 2016
[4]苏鲁部分地区禽致病性大肠杆菌的分离及2个O78分离株致病性的研究[D]. 曹春光.扬州大学 2015
[5]抗S.suis BF中药的筛选及大黄素对毒力基因和luxS的影响[D]. 韩强.东北农业大学 2014
[6]甘草根提取物对番茄枯萎病菌生物活性及抑菌机理的研究[D]. 孙红霞.山西农业大学 2014
[7]APEC毒力岛基因irp2、fyua缺失对其毒力影响的研究[D]. 邵颖.安徽农业大学 2014
[8]黄芩醇提物抑菌成分的初步确定及对黑根霉抑菌机理研究[D]. 刘影.南京师范大学 2014
[9]禽病原性大肠杆菌ompA、ompT基因和肠炎沙门氏菌ompA、pgtE基因突变株的构建及其生物学特性研究[D]. 周业菲.扬州大学 2013
[10]甘草提取物及有效成分的抗菌活性研究[D]. 刘一.延边大学 2013
本文编号：2913082
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/2913082.html
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