猪伪狂犬病病毒体外下调宿主细胞SLA-Ⅰ的分子机制
发布时间：2020-12-13 01:00
猪伪狂犬病病毒（PRV）感染引起的猪伪狂犬病（PR）是一种严重危害养猪业的传染病。免疫逃逸是PRV感染的重要特征,也是PRV持续性感染和难以被根除的主要原因。已有研究证实,PRV可通过下调宿主细胞表面猪白细胞抗原Ⅰ类分子（SLA-Ⅰ）（猪源MHCⅠ类分子）的表达而产生免疫逃逸,但引起SLA-Ⅰ表达下调的分子机制尚未阐明。本研究以临床分离的PRV变异株HB1201为研究对象,围绕PRV诱导SLA-Ⅰ分子下调的分子机制进行深入研究,并确定下调SLA-Ⅰ分子表达的重要病毒蛋白,为解析PRV的致病机制提供科学依据。为研究PRV对SLA-Ⅰ分子表达的影响,利用本实验室分离的PRV变异株HB1201感染猪肾细胞（PK-15）,通过流式细胞术分析发现,PRV感染能够明显下调PK-15细胞表面SLA-Ⅰ分子的表达水平。进一步分析了 PRV对宿主PK-15、原代猪肺泡巨噬细胞（PAMs）及猪睾丸细胞（ST）SLA-Ⅰ重链（HC）和SLA-Ⅰ轻链（β2m）蛋白表达的影响,证实PRV能够明显下调以上三种宿主细胞SLA-ⅠHC的表达水平,但对SLA-Ⅰβ2m的表达并无明显影响。同时,研究发现PRV对SLA-Ⅰ...
【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：95 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２－２?ＰＲＶ－ＨＢ１２０１对感染细胞中ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ和Ｐ２ｍ蛋白水平的影响??将ＰＲＶ－ＨＢ１２０１以１０ＭＯＩ分别模拟感染或感染ＰＫ－１５细胞（Ａ）、ＳＴ细胞（Ｂ）和ＰＡＭｓ?（Ｃ）
ＰＫ－１５细胞，感染后１２?ｈ后收取细胞样品，利用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ分析ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ蛋白水平的变化。??结果显示，与对照组相比，ＰＲＶ－ＨＢ１２０１能明显下调细胞中ＳＬＡ－ＩＨＣ蛋内的表达水平，而紫外??灭活的ＨＢ１２０１对细胞中ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ蛋白的表达水平却并没有明显影响（图２－３）。这些结果说??明ＰＲＶ下调细胞中ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ分子的表达依赖病毒在细胞屮的复制。??ＷＳ、??ＫＤａ?＜?冬??４０?＾ＳＬＡ－．ＨＣ??１?０．１７?０．９９??５５—霸曜：、ｇ（．??Ｂ－ａｃｔｉｎ??４０???图２－３?ＰＲＶ的复制对病毒下调ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ表达水平的影响??分别将ＰＲＶ－ＨＢ１２０１或紫外灭活的ＰＲＶ－ＨＢ１２０１以１０?Ｍ０Ｉ模拟感染或感染ＰＫ－Ｉ５细胞。感染后１２?ｈ收取细胞??样品，对如图所示蛋白进行Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ分析。利用ＩｉｎａｇｅＪ软件对ＳＬＡ－丨ＨＣ和ｐ－ａｃｔｉｎ的灰度值比值进行分析，??并把模拟感染组ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ和卩－ａｃｔｉｎ的灰度值比值设为１。??Ｆｉｇ．２－３?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｖｉｒａｌ?ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ??ＰＫ－１５?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ｍｏｃｋ?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｏｒ?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ＰＲＶ－ＨＢ１２０１?ｏｒ?ＵＶ－ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ?ＨＢ１２０１?ａｔ?１０?ＭＯＩ．?Ａｔ?１２?ｈｐｉ
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本文编号：2913588
【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：95 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２－２?ＰＲＶ－ＨＢ１２０１对感染细胞中ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ和Ｐ２ｍ蛋白水平的影响??将ＰＲＶ－ＨＢ１２０１以１０ＭＯＩ分别模拟感染或感染ＰＫ－１５细胞（Ａ）、ＳＴ细胞（Ｂ）和ＰＡＭｓ?（Ｃ）
ＰＫ－１５细胞，感染后１２?ｈ后收取细胞样品，利用Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ分析ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ蛋白水平的变化。??结果显示，与对照组相比，ＰＲＶ－ＨＢ１２０１能明显下调细胞中ＳＬＡ－ＩＨＣ蛋内的表达水平，而紫外??灭活的ＨＢ１２０１对细胞中ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ蛋白的表达水平却并没有明显影响（图２－３）。这些结果说??明ＰＲＶ下调细胞中ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ分子的表达依赖病毒在细胞屮的复制。??ＷＳ、??ＫＤａ?＜?冬??４０?＾ＳＬＡ－．ＨＣ??１?０．１７?０．９９??５５—霸曜：、ｇ（．??Ｂ－ａｃｔｉｎ??４０???图２－３?ＰＲＶ的复制对病毒下调ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ表达水平的影响??分别将ＰＲＶ－ＨＢ１２０１或紫外灭活的ＰＲＶ－ＨＢ１２０１以１０?Ｍ０Ｉ模拟感染或感染ＰＫ－Ｉ５细胞。感染后１２?ｈ收取细胞??样品，对如图所示蛋白进行Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ分析。利用ＩｉｎａｇｅＪ软件对ＳＬＡ－丨ＨＣ和ｐ－ａｃｔｉｎ的灰度值比值进行分析，??并把模拟感染组ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ和卩－ａｃｔｉｎ的灰度值比值设为１。??Ｆｉｇ．２－３?Ｔｈｅ?ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｖｉｒａｌ?ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＳＬＡ－Ｉ?ＨＣ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ??ＰＫ－１５?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ｍｏｃｋ?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｏｒ?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ＰＲＶ－ＨＢ１２０１?ｏｒ?ＵＶ－ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ?ＨＢ１２０１?ａｔ?１０?ＭＯＩ．?Ａｔ?１２?ｈｐｉ
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