抗狂犬病毒单克隆抗体的制备及胶体金试剂盒的建立

发布时间：2020-12-13 03:39

　　研究目的:为了探索狂犬病毒单克隆抗体表达条件,为后续深入研究制备稳定、高效价和质量优良的抗体提供经验,同时建立胶体金试剂盒用于检测狂犬病毒,为狂犬病毒提供一种简便、快速和灵敏度高的检测方法,因此本文对抗狂犬病毒单克隆抗体的制备以及胶体金试剂盒进行了初步的研究。本文以杂交瘤细胞为研究对象,对杂交瘤细胞体外培养条件、抗狂犬病毒单克隆抗体的制备、抗狂犬病毒杂交瘤细胞纯化筛选的制备、生物反应器培养条件和胶体金试剂盒的建立进行了研究。结果:1、静置培养条件下,用显微镜观察杂交瘤细胞贴壁生长,表面光滑透亮,圆润,倾向于聚集生长,生长速度快;细胞经过低血清驯化培养后在2%、5%和10%血清浓度中生长情况差异不大,在无血清条件下仍不能正常生长;细胞起始培养密度在2.5×10~5个/mL时能正常生长,低于1×10~5个/mL时不能正常生长;细胞能在1640培养基和DF12培养基中生长,不能在DMEM和F12培养基中生长;细胞株分泌抗体不稳定,出现退化。2、通过体内诱生法得到两株细胞株注射的小鼠腹水呈阳性,抗体效价为1:1600;PCR检测69和102细胞株发现存在支原体污染。3、通过单克隆筛选得到B6、... 

【文章来源】：广西师范大学广西壮族自治区

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

细胞株支原体污染检测

e f图 4-1 杂交瘤细胞生长状态a.细胞培养 0h 时的状态； b.细胞培养 24h 时的状态；c.细胞培养 48h 时的状态；d.细胞培养 72h 时的状态；e.细胞培养 96h 时的状态；f.细胞培养 120h 时的状态；Figure 4-1 Hybridoma cell growth statusa. State of cell culture at 0h; b. State of cell culture at 24h; c. State of cell culture at 48h;d. State of cell culture at 72h; e. State of cell culture at 96h; f. State of cell culture at 120h;4.3.2 单克隆筛选杂交瘤细胞结果从 96 孔板中选择显色效果较好，OD 值较高的细胞在 24 孔板中扩大培养，HT 筛选，待细胞长满后 ELISA 检测。

试纸条的检测：样品的制备：取已标记抗体的胶体金 100 μL，15000 10 min，弃上清，沉淀用加有 1 %甘油的 PBST（0.5 %吐温+PBS）悬 1 μL 1:1000 稀释的抗原，阴性对照不加抗原。在试纸条上划好检测线后，在样品释放垫中滴入样品，待样品漫至吸水垫，观察检测线与质控情况。 结果1 胶体金的稳定性测试胶体金放置在 37℃、室温和 4℃一个月 ，未出现凝集现象。


本文编号：2913826