猪TGEV N蛋白单克隆抗体的研制及夹心ELISA方法的初步建立

发布时间：2020-12-14 11:29

　　猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起猪严重的腹泻并可导致仔猪死亡,尤其是2周龄以内仔猪死亡率高达100%,很容易和其它肠道病毒发生混合感染,并且和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的临床症状极为相似,给病原的检测造成困扰。本实验用抗TGEV重组N蛋白的单克隆抗体和多克隆抗体建立一种捕获抗原的双抗体夹心ELISA检测方法,经过检验,效果良好,可以做为病原诊断的可靠简便的方法。本研究从以下几个方面展开:1、抗TGEV重组N蛋白单克隆抗体的制备。利用大肠杆菌原核表达系统表达TGEV重组N蛋白,经过纯化和鉴定后免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞按常规方法融合筛选后得到2株能稳定分泌抗重组N蛋白抗体的杂交瘤细胞株2G7和2C2。2株单抗亚类均为IgG1;间接免疫荧光表明2株单抗能识别细胞中的TGEV,感染细胞呈现亮绿色荧光;杂交瘤细胞培养上清效价稳定在1:12800;腹水的间接ELISA效价均为1:10~8。结果表明2株单抗细胞株遗传稳定,分泌的抗体特异性好。2、抗TGEV全病毒和重组N蛋白多抗血清的制备。将纯化的病毒和重组N蛋白分别免疫家兔,采集血清经过蛋白A亲和层析纯化得到2种多抗血... 

【文章来源】：湖南农业大学湖南省

【文章页数】：76 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

单抗亚类鉴定结果

图 5-1 特异性实验结果Fig5-1. Results of specialization test法敏感性毒（1337μg/ml）稀释度 1:20、1:40、1:80、的临界值和 P/N 值可得该 ELISA 方法可以原浓度为 13.37μg/ml，即该方法最低病毒检表 5-9 夹心 ELISA 方法敏感性Table 5-9 The sensitivity of the sanwich ELISAmetho 40 80 100 51 0.437 0.275 0.260 65 3.564 2.244 2.122

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
[1]猪传染性胃肠炎和流行性腹泻二联核酸疫苗免疫效力研究[D]. 孟凡丹.东北农业大学 2011
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本文编号：2916336