犬瘟热病毒H蛋白与不同动物SLAM相互作用致细胞融合效率差异的分子机制
发布时间:2020-12-15 19:12
犬瘟热是由犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)引起的一种烈性、高度接触性传染病。犬瘟热病毒属于副粘病毒科、麻疹病毒属,是有囊膜的单股负链不分节段的RNA病毒,基因组从3’端到5’端依次编码6个结构蛋白,其中血凝素蛋白(H)和融合蛋白(F)分别与宿主细胞的细胞膜的结合和融合。病毒特异性受体在宿主细胞表面的表达是病毒侵入的首要条件,也是决定病毒组织嗜性和发病机理的重要因素。目前,CDV已知的两种主要细胞受体分别是:信号淋巴细胞激活分子(Signaling Lymphocyte Activation Molecules,SLAM)和细胞粘附分子-4(nectin-4),这两种受体对CDV吸附侵入到宿主体内起重要作用。SLAM为犬瘟热病毒感染宿主免疫细胞的受体,其与CDV H蛋白识别是病毒致病性的基础。不同动物SLAM可变区(V)氨基酸差异可影响受体与CDV H相互作用,进而可能导致宿主对CDV易感性的不同。我们前期研究结果表明水貂对CDV易感性低于貉,且同一株CDV在表达貉子SLAM受体的BHK细胞上比在表达水貂SLAM受体的细胞所引起的病毒效价高,进一步比对S...
【文章来源】:中国农业科学院北京市
【文章页数】:48 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
SLAM氨基酸序列比对及其蛋白3D结构
图 2. 8 种质粒的间接免疫荧光Figure 2. Indirect immunofluorescence of different mutants)pDisplay-rSLAM (C)pDisplay-mSLAM-V74I (D)pDisplay-mSLAM-R129Q (E)pDisplayV (G)pDisplay-rSLAM-Q129R (H)pDisplay-rSLAM-I74V/Q129R (I)未转染阴性对照)pDisplay-rSLAM (C)pDisplay-mSLAM-V74I (D)pDisplay-mSLAM-R129Q (E)pDisplayG)pDisplay-rSLAM-Q129R (H)pDisplay-rSLAM-I74V/Q129R (I) Negative control (on术定量 SLAM 表达量y-m/rSLAM 等 8 种质粒分别转染 BHK 细胞,将不同 SLAM说明书操作染色表达细胞,每种细胞取 3×104个进行流式细性细胞比例,结果显示八种不同的表达细胞其 SLAM 表达重复四次,进行差异性分析,水貂 SLAM 在点突变前后, SLAM 表达有显著降低,平均蛋白质表达率从 95.6%降低至突变相比于突变前其 SLAM 表达从 95.6%降低至 93.9%,但貂 SLAM 74 和 129 位氨基酸的双突变,使得 SLAM 表达比
图 3. 流式细胞术定量 SLAM 表达量Figure 3. Flow cytometric quantification of SLAM expression.(A)流式细胞术检测 SLAM 表达,从左上向右依次是阴性对照细胞(0.56%),pDisplay-mSLAM (98.06%)、rSLAM (93.69%)、mSLAM-V74I(91.09%) 、 mSLAM-R129Q (95.07%) 、 mSLAM-V74I/R129Q (97.51%) 及 rSLAM-I74V (94.76%) 、 rSLAM-Q129R (94.35%) 、rSLAM-I74V/Q129R (92.74%) (B)流式细胞术结果统计分析 *P<0.05,数据表示:平均值±标准误(A) From top left to right: negative control cells (0.56%), pDisplay-mSLAM (98.06%), rSLAM (93.69%), mSLAM-V74I (91.09%),mSLAM-R129Q (95.07%), mSLAM-V74I/R129Q (97.51%), rSLAM-I74V (94.76%), rSLAM-Q129R (94.35%), rSLAM-I74V/Q129R (92.74%)(B) Statistical analysis of flow cytometry results; data represent mean±standard error. *P < 0.05.2.2.5 细胞融合及其 Hoechst33342 核染色结果使用 pCI-H、pCI-F 与八种不同 SLAM 表达质粒共转染 BHK 细胞,转染 24h 左右出现细胞融合(图 4.A),转染 48h 左右进行细胞固定及 Hoechst33342 核染色,观察合胞体,细胞进行染色后,在荧光显微镜下成明亮蓝色荧光,合胞体成聚集蓝色光团,十分明显。观察发现水貂 SLAM突变后所导致的细胞融合,即 mSLAM-V74I、mSLAM-R129Q、mSLAM-V74I/R129Q 所导致合胞体有明显的变大、增多;而貉子突变后(rSLAM-I74V、rSLAM-Q129R、rSLAM-I74V/Q129R )引起的细胞融合合胞体大小及数目从图片上观察变化不大(图 4. B);而单独转染 SLAM 质粒、
【参考文献】:
期刊论文
[1]犬瘟热病毒受体及其跨宿主感染[J]. 王雅文,赵建军,闫喜军. 病毒学报. 2017(03)
[2]稳定表达犬瘟热病毒细胞受体SLAM的BHK-21/SLAM细胞系的建立[J]. 朱颖,刘文鑫,赵姝静,李丹丹,冯瑜菲,关玮琨,何丽丽,江馗语,师东方. 中国预防兽医学报. 2014(06)
[3]菏泽市犬瘟热病毒的分离与鉴定[J]. 万双秀. 中国动物检疫. 2013(11)
[4]麻疹病毒受体与病毒侵入[J]. 逯光文,高福,严景华. 生物工程学报. 2013(01)
[5]稳定表达貉犬瘟热病毒细胞受体SLAM的Vero细胞系的建立及应用[J]. 赵建军,闫如勋,张海玲,张蕾,胡博,白雪,邵西群,柴秀丽,闫喜军,吴威. 微生物学报. 2012(12)
[6]狐、貉和水貂犬瘟热病毒受体SLAM的基因克隆及其真核表达[J]. 赵建军,张海玲,高晗,赵春霏,柴秀丽,陈涛,闫喜军,吴威. 兽类学报. 2010(01)
博士论文
[1]犬瘟热病毒敏感细胞系和感染性克隆的构建与初步应用研究[D]. 刘玉秀.吉林大学 2014
本文编号:2918770
【文章来源】:中国农业科学院北京市
【文章页数】:48 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
SLAM氨基酸序列比对及其蛋白3D结构
图 2. 8 种质粒的间接免疫荧光Figure 2. Indirect immunofluorescence of different mutants)pDisplay-rSLAM (C)pDisplay-mSLAM-V74I (D)pDisplay-mSLAM-R129Q (E)pDisplayV (G)pDisplay-rSLAM-Q129R (H)pDisplay-rSLAM-I74V/Q129R (I)未转染阴性对照)pDisplay-rSLAM (C)pDisplay-mSLAM-V74I (D)pDisplay-mSLAM-R129Q (E)pDisplayG)pDisplay-rSLAM-Q129R (H)pDisplay-rSLAM-I74V/Q129R (I) Negative control (on术定量 SLAM 表达量y-m/rSLAM 等 8 种质粒分别转染 BHK 细胞,将不同 SLAM说明书操作染色表达细胞,每种细胞取 3×104个进行流式细性细胞比例,结果显示八种不同的表达细胞其 SLAM 表达重复四次,进行差异性分析,水貂 SLAM 在点突变前后, SLAM 表达有显著降低,平均蛋白质表达率从 95.6%降低至突变相比于突变前其 SLAM 表达从 95.6%降低至 93.9%,但貂 SLAM 74 和 129 位氨基酸的双突变,使得 SLAM 表达比
图 3. 流式细胞术定量 SLAM 表达量Figure 3. Flow cytometric quantification of SLAM expression.(A)流式细胞术检测 SLAM 表达,从左上向右依次是阴性对照细胞(0.56%),pDisplay-mSLAM (98.06%)、rSLAM (93.69%)、mSLAM-V74I(91.09%) 、 mSLAM-R129Q (95.07%) 、 mSLAM-V74I/R129Q (97.51%) 及 rSLAM-I74V (94.76%) 、 rSLAM-Q129R (94.35%) 、rSLAM-I74V/Q129R (92.74%) (B)流式细胞术结果统计分析 *P<0.05,数据表示:平均值±标准误(A) From top left to right: negative control cells (0.56%), pDisplay-mSLAM (98.06%), rSLAM (93.69%), mSLAM-V74I (91.09%),mSLAM-R129Q (95.07%), mSLAM-V74I/R129Q (97.51%), rSLAM-I74V (94.76%), rSLAM-Q129R (94.35%), rSLAM-I74V/Q129R (92.74%)(B) Statistical analysis of flow cytometry results; data represent mean±standard error. *P < 0.05.2.2.5 细胞融合及其 Hoechst33342 核染色结果使用 pCI-H、pCI-F 与八种不同 SLAM 表达质粒共转染 BHK 细胞,转染 24h 左右出现细胞融合(图 4.A),转染 48h 左右进行细胞固定及 Hoechst33342 核染色,观察合胞体,细胞进行染色后,在荧光显微镜下成明亮蓝色荧光,合胞体成聚集蓝色光团,十分明显。观察发现水貂 SLAM突变后所导致的细胞融合,即 mSLAM-V74I、mSLAM-R129Q、mSLAM-V74I/R129Q 所导致合胞体有明显的变大、增多;而貉子突变后(rSLAM-I74V、rSLAM-Q129R、rSLAM-I74V/Q129R )引起的细胞融合合胞体大小及数目从图片上观察变化不大(图 4. B);而单独转染 SLAM 质粒、
【参考文献】:
期刊论文
[1]犬瘟热病毒受体及其跨宿主感染[J]. 王雅文,赵建军,闫喜军. 病毒学报. 2017(03)
[2]稳定表达犬瘟热病毒细胞受体SLAM的BHK-21/SLAM细胞系的建立[J]. 朱颖,刘文鑫,赵姝静,李丹丹,冯瑜菲,关玮琨,何丽丽,江馗语,师东方. 中国预防兽医学报. 2014(06)
[3]菏泽市犬瘟热病毒的分离与鉴定[J]. 万双秀. 中国动物检疫. 2013(11)
[4]麻疹病毒受体与病毒侵入[J]. 逯光文,高福,严景华. 生物工程学报. 2013(01)
[5]稳定表达貉犬瘟热病毒细胞受体SLAM的Vero细胞系的建立及应用[J]. 赵建军,闫如勋,张海玲,张蕾,胡博,白雪,邵西群,柴秀丽,闫喜军,吴威. 微生物学报. 2012(12)
[6]狐、貉和水貂犬瘟热病毒受体SLAM的基因克隆及其真核表达[J]. 赵建军,张海玲,高晗,赵春霏,柴秀丽,陈涛,闫喜军,吴威. 兽类学报. 2010(01)
博士论文
[1]犬瘟热病毒敏感细胞系和感染性克隆的构建与初步应用研究[D]. 刘玉秀.吉林大学 2014
本文编号:2918770
本文链接:https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/2918770.html
最近更新
教材专著