柔嫩艾美耳球虫表面抗原EtSAG4、EtSAG16和EtSAG22的免疫保护效果研究
发布时间：2020-12-19 16:20
鸡球虫病是由一种或多种艾美尔球虫感染鸡肠道细胞而引起的一类原虫疾病。艾美尔球虫的生活史极其复杂,其不仅会掠夺肠道中的营养而且会对肠道细胞造成不同程度的损伤。当前,鸡球虫病防控仍以药物为主,但长时间的使用药物使得耐药虫株不断出现,因此,球虫耐药性问题越演越烈。多年来,研究者们试图通过其他途径来解决这一问题,主要包括优化使用抗球虫药物、新型抗球虫药物的筛选以及制备新型抗球虫疫苗。虽然球虫药物筛选和新型抗球虫疫苗制作的方法早已报道,但球虫体外培养技术仍没有完全建立和虫株之间的交叉保护力较低导致抗球虫药物筛选和抗球虫疫苗研发进展缓慢。因此,本研究从找寻理想保护性抗原的角度出发,克隆了E.tenella在入侵和生长发育中扮演重要作用的表面抗原家族基因EtSAG4、EtSAG16和EtSAG22,将3个基因分别和共同插入到原核表达载体pET28a和真核表达载体pEGFP-N1之中。在此基础之上进行了动物实验,旨在评价实验动物免疫重组蛋白或重组质粒后抗E.tenella感染的保护效果。研究主要包括以下几个方面:（1）E.tenella野生株的分离和遗传多态性分析从湖北省分离获得的8个地区鸡球虫卵囊孢...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：124 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
样品采集分布图
72℃彻底延伸 10 min15℃冷却 5 min反应结束后，用 1%的琼脂凝胶电泳检测随机片段，然后利用软件对多肽片段进行分析。2.4 结果与分析2.4.1 E. tenella 野生株形态学鉴定通过饱和食盐水方法成功地从实验动物盲肠中收集到了湖北省 8 个地区的球虫卵囊，进而根据 E. tenella 形态学特征选择性的收集卵囊，通过多次复壮从盲肠中进一步获取了 21 个鸡场的 E. tenella 野生球虫株。将收集的 E. tenella 野生球虫株未孢子化卵囊在湿度、有氧和温度条件下进行卵囊孢子化，经过多次试验条件的优化获得了本实验所收集的野生球虫株的最优孢子化条件，即：在湿度为 50%、温度为 28.6℃和有氧条件下，卵囊的孢子化效率为 90%，未孢子化卵囊和孢子化的卵囊见图 2-2。
华中农业大学 2018 届博士研究生学位论文tenella 野生株 ITS1 特异性鉴定文献报导设计了鉴定不同艾美尔球虫的 ITS1 特异性引物，以鸡盲肠的随州 1 野生株基因组作为模板，利用所设计的特异性引物进行了艾S1 的 PCR 扩增，PCR 扩增产物经琼脂凝胶电泳检测，电泳结果显示 的 ITS1 能扩增出目的条带外(278bp)，其他种属球虫的 ITS1 均未能片段，电泳详见图 2-3。
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡球虫病的危害及防治[J]. 姜卓. 新农业. 2017(11)
[2]安徽省五株柔嫩艾美耳球虫的RAPD分析[J]. 黄月月,周飞亚,曾明华. 中国兽医科学. 2016(09)
[3]柔嫩艾美耳球虫感染对京海黄鸡不同组织中Zyxin、CD4和TNFRSF1A基因mRNA表达的影响[J]. 孙明明,林雨鑫,戴国俊,张菁菁,张跟喜,谢恺舟,王金玉,顾玉萍,王永娟. 畜牧兽医学报. 2014(08)
[4]湖北省规模化生态养鸡产业发展探讨[J]. 潘爱銮,李朝国,申杰,皮劲松,吴艳,袁明波,周祖涛,蒲跃进,陈志华. 湖北农业科学. 2013(23)
[5]纳川珠利溶液剂对鸡球虫病的药效学研究[J]. 常晓辉,薛飞群,费陈忠,肖遂,沈晓炯,王中艳,张丽芳. 中国家禽. 2012(01)
[6]弓形虫RH株表面抗原SAG3去信号肽基因的蛋白原核表达及鉴定[J]. 马亮,刁玉梅,任保彦,宫鹏涛,李建华,张西臣. 吉林农业大学学报. 2012(01)
[7]鸡球虫疫苗研究现状[J]. 赵蕾,于新友,王金良,李坤林. 动物医学进展. 2011(08)
[8]鸡柔嫩艾美耳球虫绵阳地方株的分离鉴定及致病性研究[J]. 陈希文,房春林,郭晓萍,陆昕,王雄清,代敏,王娜,庞瑜婧. 江苏农业科学. 2010(06)
[9]柔嫩艾美耳球虫广西南宁株的分离及鉴定[J]. 陈桂先,韦园园,陈汉忠,周坚成,王柏生,白波,吴桂贤,韦荣莲. 中国畜牧兽医. 2010(09)
[10]鸡球虫疫苗不同剂量免疫效果的临床比较[J]. 华绍桂,赖开喜,谢德华,林瑞庆,翁亚彪. 畜牧与兽医. 2010(09)
博士论文
[1]毒害艾美耳球虫配子体抗原基因的克隆表达与功能研究[D]. 刘丹丹.扬州大学 2014
[2]猪瘟病毒蛋白在宿主细胞中的表达及其对病毒感染的调控作用[D]. 蒋大良.湖南农业大学 2013
[3]柔嫩艾美耳球虫免疫调节型多价DNA疫苗的构建及免疫效果观察[D]. 宋小凯.南京农业大学 2008
[4]鸡球虫病的中药防治与DNA疫苗研究[D]. 杜爱芳.浙江大学 2004
硕士论文
[1]邵武市鸡球虫病流行病学调查[D]. 刘剑超.福建农林大学 2016
[2]柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶特性研究[D]. 朱雪龙.中国农业科学院 2016
[3]鸡柔嫩艾美耳球虫多表位亚单位疫苗的构建与免疫保护效果的评价[D]. 韩林臻.山东农业大学 2016
[4]鸡堆型艾美耳球虫Hsp90增强型核酸疫苗免疫保护研究[D]. 冯俪.东北农业大学 2015
[5]鸡球虫病三价四株活疫苗实验室效力和安全性研究[D]. 郭钰珏.山西农业大学 2015
[6]鸡球虫三价弱毒疫苗安全性及免疫效果试验[D]. 张晶艳.西北农林科技大学 2015
[7]柔嫩艾美耳球虫Etgam59基因克隆表达与免疫保护性研究[D]. 朱玉兰.扬州大学 2015
[8]柔嫩艾美耳球虫F2株弱毒疫苗的安全性检测与免疫保护性研究[D]. 陶冬.吉林农业大学 2013
[9]柔嫩艾美耳球虫4种基因的真核重组质粒构建与EtAMA1核酸疫苗的保护效果初步评价[D]. 王晔.中国农业科学院 2013
[10]鸡柔嫩艾美耳球虫RC株表面抗原SAG17、SAG18和未知蛋白HP基因的克隆与原核表达[D]. 许李丽.西南大学 2013
本文编号：2926207
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：124 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
样品采集分布图
72℃彻底延伸 10 min15℃冷却 5 min反应结束后，用 1%的琼脂凝胶电泳检测随机片段，然后利用软件对多肽片段进行分析。2.4 结果与分析2.4.1 E. tenella 野生株形态学鉴定通过饱和食盐水方法成功地从实验动物盲肠中收集到了湖北省 8 个地区的球虫卵囊，进而根据 E. tenella 形态学特征选择性的收集卵囊，通过多次复壮从盲肠中进一步获取了 21 个鸡场的 E. tenella 野生球虫株。将收集的 E. tenella 野生球虫株未孢子化卵囊在湿度、有氧和温度条件下进行卵囊孢子化，经过多次试验条件的优化获得了本实验所收集的野生球虫株的最优孢子化条件，即：在湿度为 50%、温度为 28.6℃和有氧条件下，卵囊的孢子化效率为 90%，未孢子化卵囊和孢子化的卵囊见图 2-2。
华中农业大学 2018 届博士研究生学位论文tenella 野生株 ITS1 特异性鉴定文献报导设计了鉴定不同艾美尔球虫的 ITS1 特异性引物，以鸡盲肠的随州 1 野生株基因组作为模板，利用所设计的特异性引物进行了艾S1 的 PCR 扩增，PCR 扩增产物经琼脂凝胶电泳检测，电泳结果显示 的 ITS1 能扩增出目的条带外(278bp)，其他种属球虫的 ITS1 均未能片段，电泳详见图 2-3。
【参考文献】：
期刊论文
[1]鸡球虫病的危害及防治[J]. 姜卓. 新农业. 2017(11)
[2]安徽省五株柔嫩艾美耳球虫的RAPD分析[J]. 黄月月,周飞亚,曾明华. 中国兽医科学. 2016(09)
[3]柔嫩艾美耳球虫感染对京海黄鸡不同组织中Zyxin、CD4和TNFRSF1A基因mRNA表达的影响[J]. 孙明明,林雨鑫,戴国俊,张菁菁,张跟喜,谢恺舟,王金玉,顾玉萍,王永娟. 畜牧兽医学报. 2014(08)
[4]湖北省规模化生态养鸡产业发展探讨[J]. 潘爱銮,李朝国,申杰,皮劲松,吴艳,袁明波,周祖涛,蒲跃进,陈志华. 湖北农业科学. 2013(23)
[5]纳川珠利溶液剂对鸡球虫病的药效学研究[J]. 常晓辉,薛飞群,费陈忠,肖遂,沈晓炯,王中艳,张丽芳. 中国家禽. 2012(01)
[6]弓形虫RH株表面抗原SAG3去信号肽基因的蛋白原核表达及鉴定[J]. 马亮,刁玉梅,任保彦,宫鹏涛,李建华,张西臣. 吉林农业大学学报. 2012(01)
[7]鸡球虫疫苗研究现状[J]. 赵蕾,于新友,王金良,李坤林. 动物医学进展. 2011(08)
[8]鸡柔嫩艾美耳球虫绵阳地方株的分离鉴定及致病性研究[J]. 陈希文,房春林,郭晓萍,陆昕,王雄清,代敏,王娜,庞瑜婧. 江苏农业科学. 2010(06)
[9]柔嫩艾美耳球虫广西南宁株的分离及鉴定[J]. 陈桂先,韦园园,陈汉忠,周坚成,王柏生,白波,吴桂贤,韦荣莲. 中国畜牧兽医. 2010(09)
[10]鸡球虫疫苗不同剂量免疫效果的临床比较[J]. 华绍桂,赖开喜,谢德华,林瑞庆,翁亚彪. 畜牧与兽医. 2010(09)
博士论文
[1]毒害艾美耳球虫配子体抗原基因的克隆表达与功能研究[D]. 刘丹丹.扬州大学 2014
[2]猪瘟病毒蛋白在宿主细胞中的表达及其对病毒感染的调控作用[D]. 蒋大良.湖南农业大学 2013
[3]柔嫩艾美耳球虫免疫调节型多价DNA疫苗的构建及免疫效果观察[D]. 宋小凯.南京农业大学 2008
[4]鸡球虫病的中药防治与DNA疫苗研究[D]. 杜爱芳.浙江大学 2004
硕士论文
[1]邵武市鸡球虫病流行病学调查[D]. 刘剑超.福建农林大学 2016
[2]柔嫩艾美耳球虫丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶特性研究[D]. 朱雪龙.中国农业科学院 2016
[3]鸡柔嫩艾美耳球虫多表位亚单位疫苗的构建与免疫保护效果的评价[D]. 韩林臻.山东农业大学 2016
[4]鸡堆型艾美耳球虫Hsp90增强型核酸疫苗免疫保护研究[D]. 冯俪.东北农业大学 2015
[5]鸡球虫病三价四株活疫苗实验室效力和安全性研究[D]. 郭钰珏.山西农业大学 2015
[6]鸡球虫三价弱毒疫苗安全性及免疫效果试验[D]. 张晶艳.西北农林科技大学 2015
[7]柔嫩艾美耳球虫Etgam59基因克隆表达与免疫保护性研究[D]. 朱玉兰.扬州大学 2015
[8]柔嫩艾美耳球虫F2株弱毒疫苗的安全性检测与免疫保护性研究[D]. 陶冬.吉林农业大学 2013
[9]柔嫩艾美耳球虫4种基因的真核重组质粒构建与EtAMA1核酸疫苗的保护效果初步评价[D]. 王晔.中国农业科学院 2013
[10]鸡柔嫩艾美耳球虫RC株表面抗原SAG17、SAG18和未知蛋白HP基因的克隆与原核表达[D]. 许李丽.西南大学 2013
本文编号：2926207
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/2926207.html
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