SIRT6基因干扰对水牛成纤维细胞衰老的影响

发布时间：2020-12-20 19:21

　　SIRT6是Sirtuin家族中的一员,具有去乙酰化酶活性和单ADP核糖基转移酶活性。在人和小鼠上的研究表明SIRT6是细胞及个体上调控衰老及寿命的关键基因,参与端粒维护、DNA损伤修复、糖代谢、脂代谢等多项生理活动。但目前尚未有关于水牛SIRT6基因功能的报道。本研究对SIRT6在水牛成纤维细胞衰老上的功能及作用进行了初步探讨,为水牛供体的选择与培养,水牛及相关大型动物基因保护,衰老机制的探讨等,提供实验基础以及理论依据。实验首先克隆了水牛SIRT6基因编码区,探讨不同年龄水牛成纤维细胞的增殖、衰老表型、DNA损伤位点和SIRT6基因相对表达量等差异。结果表明,获得水牛SIRT6基因编码区序列全长1080bp,可编码359个氨基酸,其中亮氨酸及脯氨酸含量（10.3%）最高,酪氨酸含量（1.1%）最低。水牛SIRT6核酸序列与牛,人序列相似性分别为98.4%,85.9%,含有Sirtuin家族特有的Sir2去乙酰化酶的催化结构;通过对水牛SIRT6组织表达谱分析,结果表明SIRT6在心、肝、脾、肺、肾、肠、胃、脑、生殖嵴、皮肤中均有表达,生殖嵴中表达量最高,皮肤与心脏次之,在肝脏中表达... 

【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校

【文章页数】：85 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

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Ａ?Ｂ??图１－２水牛ＳＩＲＴ６基因特异性扩增??Ｆｉｇ．?１－２?Ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＳＩＲＴ６?ｇｅｎｅ?ｉｎ?ｂｕｆｆａｌｏ??Ａ：水牛皮肤组织ＲＮＡ的特异性条带；Ｂ：?Ｍｌ?Ｍａｋｅｒ?ＩＩＩ，?１水牛ＳＩＲＴ６扩增产物??Ａ：?Ｓｐｅｃｉｆｉｃ?ｂａｎｄｓ?ｏｆ?ＲＮＡ?ｉｎ?Ｂｕｆｆａｌｏ?ｓｋｉｎ?ｔｉｓｓｕｅ；?Ｂ：Ｍ１?Ｍａｒｋｅｒ?ＩＩＩ，?１?ｂｕｆｆａｌｏ?ＳＩＲＴ６?ｇｅｎｅ?ｃｄｓ??２．２?ｐＥＡＳＹ－ＳＩＲＴ６平端载体构建??将ＰＣＲ产物进行回收纯化，并与ｐＥＡＳＹ－Ｂｌｕｎｔ?Ｓｉｍｐｌｅ载体连接，经过转化、??涂板、摇菌、质粒小提后，与ｐＥＡＳＹ－ＢｌｕｎｔＳｉｍｐｌｅ空白载体进行凝胶电泳分析。??结果显示，连接产物质粒比ｐＥＡＳＹ－ＢｌｕｎｔＳｉｍｐｌｅ空白载体大１０８０ｂｐ左右，测序??结果显示特异性条带为１０８０ｂｐ，表明成功扩增获得水牛ＳＩＲＴ６基因编码区序列。??Ｍｌ?１?２??６！３３ｌ＞ｐ???５０２６ｂｐ??３９９？ｌｉｐ???３０４９ｂｐ?——??■??图?１－３?ｐＥＡＳＹ－ＳＩＲＴ６－Ｂｌｕｎｔ－ｓｉｎｉｐｌｅ?载体构建??Ｆｉｇ．?１－３?ｐＥＡＳＹ－ＳＩＲＴ６－Ｂｌｕｎｔ－ｓｉｍｐｌｅ?Ｆｌａｔ?ｅｎｄ?ｖｅｃｔｏｒ?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ??Ｍｌ，?Ｓｕｐｅｒｃｏｌｉｅｄ?ＤＮＡ?Ｌａｄｄｅｒ?Ｍａｒｋｅｒ?；?１，空白质粒?ｐＥＡＳＹ－Ｂｌｕｎｔ－ｓｉｍｐｌｅ；?２，ｐＥＡＳＹ－ＳＩＲＴ６??Ｍｌ：?Ｓｕｐｅｒｃｏｌｉｅｄ?ＤＮＡ?Ｌａｄｄｅｒ?Ｍａｒｋｅｒ；?１

?〇?１?Ｍ￣Ｉ?［ＨＨＩ［ＨＩ—ＣＨＨ—?〇Ｃｏ－?Ｒ？ｇ？ｎ＊?－?ａ？ｍ？ｆ－Ｒ０Ｕ＜ｒ??图１－８水牛Ｓ１ＲＴ６蛋白二级结构预测??Ｆｉｇ．?１－８?Ｔｈｅ?ｓｅｃｏｎｄａｒｙ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｂｕｆｆａｌｏ?ＳＩＲＴ６?ｐｒｏｔｅｉｎ??２．４水牛ＳＩＲＴ６在各组织中的表达差异??采集水牛胎牛各部位组织，包括心、肝、脾、肺、肾、肠、肖、脑、卞．祯嵴、??皮肤，用Ｔｒｉｚｏｌ法提取各组织ＲＮＡ，反转为ｃＤＮＡＡｌ？进彳ｒｑＲＴ－ＰＣＲ检测。结Ｕ示??３１??

【参考文献】：
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本文编号：2928414