沙门氏菌E3泛素连接酶SspH2和SlrP调控Ⅰ型IFN信号通路的研究

发布时间：2020-12-20 19:36

　　沙门氏菌能够通过Ⅲ型分泌系统（Type III secretion systems,T3SS）分泌细菌蛋白（效应蛋白）到宿主细胞里,从而调控宿主一系列生理功能。沙门氏菌有两种不同的T3SS,分别为由毒力岛（Salmonella pathogenicity islands,SPI）-1编码的T3SS-1和由SPI-2编码的T3SS-2。泛素化作为蛋白翻译后的一种修饰方式,在抵抗细菌感染时发挥重要作用,然而细菌也能够利用T3SS分泌系统,通过各种泛素途径对宿主进行瞬时和空间调控。有文献报道,细菌可以通过含有LRR结构域的E3泛素连接酶调控宿主的天然免疫反应。如福氏志贺菌IpaH9.8通过泛素化降解NEMO,从而抑制NF-κB信号通路的激活;IpaH4.5通过泛素化降解TBK1,从而抑制IRF3的磷酸化、入核及IFN的产生。沙门氏菌E3泛素连接酶SspH2和SlrP也具有LRR结构域,然而目前并没有研究报道SspH2和SlrP在IFN信号通路中的作用。为研究沙门氏菌E3泛素连接酶SspH2和SlrP在IFN信号通路中的作用,本研究首先筛选到一株能正常编码并表达SspH2和SlrP蛋白的沙门氏... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

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摘要
abstract
第一章 引言
    1.1 沙门氏菌微生物学特性
        1.1.1 沙门氏菌的流行状况及临床特征
        1.1.2 沙门氏菌的血清型
        1.1.3 沙门氏菌的致病机制
    1.2 I型 IFN的产生及其调控机制
        1.2.1 I型 IFN
        1.2.2 I型 IFN信号通路
        1.2.3 沙门氏菌感染时产生的I型 IFN
    1.3 细菌E3泛素连接酶蛋白
        1.3.1 不同细菌E3 泛素连接酶蛋白调控天然免疫的研究进展
        1.3.2 沙门氏菌E3 泛素连接酶蛋白调控天然免疫的研究进展
    1.4 本研究的目的与意义
第二章 沙门氏菌E3 泛素连接酶SspH2和SlrP调控I型 IFN信号通路的研究
    2.1 实验材料
        2.1.1 菌株、细胞株和质粒
        2.1.2 主要试剂和抗体
        2.1.3 主要仪器设备
        2.1.4 主要试剂的配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 全基因组测序
        2.2.2 细菌DNA的提取
        2.2.3 原核表达质粒的构建
        2.2.4 原核质粒表达和蛋白纯化
        2.2.5 多抗的制备及检测
        2.2.6 ssph2和slrP基因缺失株的构建
        2.2.7 野生菌与基因缺失株生长曲线的测定
        2.2.8 真核表达质粒的构建和转染
        2.2.9 双荧光素酶报告系统试验
        2.2.10 Western blotting检测
        2.2.11 免疫共沉淀试验
        2.2.12 细菌侵染细胞试验
        2.2.13 统计学方法
    2.3 实验结果
        2.3.1 全基因组测序结果
        2.3.2 SspH2、SlrP原核表达和蛋白纯化
        2.3.3 多抗识别外源性和内源性表达的SspH2、SlrP蛋白
        2.3.4 ssph2和slrP基因缺失株的构建及鉴定
            2.3.4.1 PCR鉴定ssph2和slrP基因缺失株构建成功
            2.3.4.2 Western blotting鉴定ssph2和slrP基因缺失株构建成功
        2.3.5 ssph2和slrP基因缺失不影响沙门氏菌的生长
        2.3.6 SspH2 抑制I型 IFN信号通路
            2.3.6.1 SspH2 抑制IFN和 ISRE启动子活性
            2.3.6.2 SspH2 与干扰素调控因子IRF3 相互作用
            2.3.6.3 SspH2 增强IRF3 的泛素化
            2.3.6.4 SspH2 影响IRF3 的表达
        2.3.7 SlrP不影响I型 IFN信号通路
            2.3.7.1 SlrP与天然免疫关键分子MDA5、RIG-I、MAVS、TANK等相互作用
            2.3.7.2 SlrP不影响IFN和 ISRE启动子活性
            2.3.7.3 SlrP对 IRF3 的表达无影响
    2.4 讨论
第三章 全文结论
参考文献
附录
    1.CVCC542和CVCC542Δssph2菌株的ssph2核酸序列比对结果
    2.CVCC542和CVCC542ΔslrP菌株的slrP核酸序列比对结果
致谢
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]沙门菌致病岛2Ⅲ型分泌系统研究进展[J]. 殷俊磊,李求春,焦新安.  微生物学报. 2016(04)



本文编号：2928429