表达靶向树突状细胞小肽的重组狂犬疫苗的研究

发布时间：2020-12-21 23:04

　　狂犬病是一种古老的人畜共患传染病,每年在世界各地造成超过59,000人死亡。其致病病原体狂犬病病毒（Rabies Virus,RABV）编码五种结构蛋白:核蛋白（N）,磷蛋白（P）,基质蛋白（M）,糖蛋白（G）和病毒RNA聚合酶（L）。RABV进入机体后,沿外周神经系统迅速移动,最终到达中枢神经系统（Central nervous system,CNS）。一旦出现临床症状,狂犬病的死亡率接近100%。虽然狂犬病死亡率高,但是人类和动物可以通过接种疫苗来预防狂犬病,疫苗能够激活免疫系统,产生抗体以中和病毒。自1885年以来,疫苗接种已成为保护人类免于狂犬病危害的最有效途径。全球每年有数百万人接种狂犬疫苗,约有25万人因接种疫苗得到保护。我们之前的研究表明,树突状细胞（Dendritic cell,DC）的激活可以增强RABV的免疫原性。当重组RABV过表达与DC成熟相关的细胞因子或趋化因子时能够达到增强DC活化的目的。然而,这些细胞因子或趋化因子的过度表达可能会产生副作用。因此,需要进一步研究通过仅增加r RABV与DC的结合来增强RABV免疫原性。在本研究中,构建了融合表达DC靶向小肽... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：97 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

DC表面可用于抗体治疗的受体Figure1-1surfacereceptorstargettedforantigentargetingtherapiesonDC

同样采用融合 PCR 将 DCCp 插入 RABV G 蛋白信号肽之后。PCR 引物设计列于表 3.1。3.2.2 质粒构建（1） 融合 PCR融合 PCR 由两轮 PCR 反应组成，反应策略如图 3.1 第一轮又分为反应 1 和反应2，反应条件为 95℃ 变性 10s，55℃ 退火 10s，72℃ 延伸 30s，循环 35 次，72℃延伸 10 min，反应体系如表 3.2，反应 1 的上下游引物分别是 LBNSE/G SwaⅠ-F 和Bp1-R/Cp1-R，反应 2 的上下游引物分别是 Bp2-F/ Cp2-F 和 LBNSE/G PpuMⅠ-R；反应 1 和反应 2 所得的产物 1 和产物 2 经纯化试剂盒纯化，作为模板参与融合 PCR 第二轮反应（反应 3），反应 3 反应条件与反应 1 和反应 2 相同，反应体系如表 3.3。

rLBNSE、rLBNSE-DCBp和rLBNSE-DCCp的构建Fig.4-1ConstructionofrLBNSE,rLBNSE-DCBpandrLBNSE-DCCp


本文编号：2930669