Luman/CREB3介导的UPR在山羊子宫内膜上皮细胞炎症反应中的作用研究

发布时间：2020-12-23 08:18

　　子宫内膜炎是一种重要的产科疾病,是造成奶产业效益低下的重要原因。大肠杆菌是引起子宫内膜炎的主要致病菌之一,大肠杆菌LPS作为一种致病因子,在感染中起到关键性的作用。研究显示,内质网应激与UPR在子宫内膜炎的发生发展中起到重要的调节作用,Luman作为内质网膜结合的转录因子,具体调节机制仍不明确。本试验通过构建Luman慢病毒干扰的山羊子宫内膜上皮细胞系,探究在LPS刺激下Luman对UPR的调控机制及相关炎性因子的表达情况,进一步明确内质网应激与UPR在先天性免疫中的调节作用,为子宫内膜炎的治疗提供理论依据。试验结果如下:（1）构建山羊Luman慢病毒干扰载体,qPCR,Western Blot和免疫荧光检测干扰效率,干扰效率可达70%;CCK8试剂盒和BeyoClick?EdU-555试剂盒检测细胞的增殖情况,发现Luman干扰后能显著提高细胞的增殖水平;流式细胞术检测细胞周期,qPCR检测周期蛋白Cyclin A,Cyclin B,Cyclin D的表达量,发现Luman干扰后G1期显著降低,周期蛋白Cyclin D表达量显著增加。（2）应用免疫荧光对gEECs中的Luman进行定... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 Luman和内质网应激的研究进展
    1.1 内质网应激
        1.1.1 内质网的结构与功能
        1.1.2 内质网应激与未折叠蛋白反应
        1.1.3 内质网应激与疾病
    1.2 Luman的研究概况
        1.2.1 Luman基因的发现
        1.2.2 Luman基本结构及其家族成员
        1.2.3 Luman的生物学功能
        1.2.4 Luman在内质网应激中的作用
第二章 UPR与先天性免疫
    2.1 先天性免疫的研究概况
        2.1.1 模式识别受体概述
        2.1.2 先天性免疫信号通路
    2.2 UPR与先天性免疫
        2.2.1 UPR与细菌性感染
        2.2.2 UPR与神经免疫性疾病
第三章 山羊Luman基因shRNA干扰慢病毒载体的构建
    3.1 试验材料
        3.1.1 细菌、质粒和细胞
        3.1.2 试剂
        3.1.3 主要仪器
    3.2 试验方法
        3.2.1 山羊Luman shRNA慢病毒干扰载体的构建
        3.2.3 山羊Luman shRNA慢病毒颗粒的包装
        3.2.4 山羊Luman shRNA干扰片段的筛选
    3.3 试验结果
        3.3.1 Luman干扰慢病毒载体的鉴定
        3.3.2 慢病毒包装结果鉴定
        3.3.3 山羊EECs Luman干扰效果的鉴定
    3.4 讨论
    3.5 小结
第四章 Luman介导的UPR对炎症反应的影响
    4.1 试验材料
        4.1.1 细胞
        4.1.2 主要试剂
        4.1.3 主要仪器
    4.2 试验方法
        4.2.1 免疫荧光检测Luman在 gEECs中的定位表达
        4.2.2 Luman对 gEECs增殖及周期的影响
        4.2.3 LPS对 gEECs UPR相关蛋白及相关炎性因子分泌的影响
        4.2.4 LPS对 gEECs Luman干扰细胞系UPR相关蛋白及相关炎性因子分泌的影响
        4.2.5 4-PBA对 gEECs Luman干扰细胞系IRE1 及炎性因子分泌的影响
    4.3 结果与分析
        4.3.1 Luman在 gEECs中的定位表达
        4.3.2 Luman对 gEECs增殖、周期及周期蛋白的影响
        4.3.3 LPS对 gEECs UPR相关蛋白及相关炎性因子分泌的影响
        4.3.4 LPS对 gEECs Luman干扰细胞系UPR标志因子及炎性因子的影响
        4.3.5 4-PBA对 gEECs Luman干扰细胞系IRE1 及相关炎性因子的影响
    4.4 讨论
    4.5 小结
结论
参考文献
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]内质网应激参与介导脂多糖诱导的大鼠肝细胞凋亡[J]. 季英磊,闫骏,王艳莎,刘夷嫦,谷振勇.  法医学杂志. 2014(01)



本文编号：2933380