肠炎沙门菌nmpC基因缺失株的生物学特性及免疫效果分析

发布时间：2020-12-26 23:27

　　肠炎沙门菌（Salmonella enteritis）为肠道胞内菌,能引起胃肠炎、腹泻,感染严重者可导致死亡,是一种严重的人畜共患菌。抗生素常常成为控制沙门菌的首选,近几年沙门菌对抗生素产生耐药性,不能有效的治疗沙门菌。疫苗接种是一种很好的控制措施,本试验利用同源重组技术,敲除靶基因,并对nmpC基因进行了初步研究,为研制减毒活疫苗提供参考。本研究利用分子生物技术获得重组质粒pET-28a-nmpC,将其转化入表达菌株BL21经IPTG诱导,得到His-NmpC原核蛋白,经SDS-PAGE分析与Western blot验证,NmpC原核蛋白纯化后免疫小鼠对其免疫保护力及抗体水平进行Western blot鉴定和ELISA检测。结果显示,NmpC为包涵体表达且分子质量约为38kD,免疫印迹分析结果显示,NmpC原核蛋白可与His标签抗体和多抗血清特异性识别,说明NmpC蛋白具有良好的免疫原性,且对小鼠免疫保护力达到70%,是一个很好的疫苗靶点。利用λ-Red同源重组技术,将携带氯霉素敏感性的pKD3质粒对肠炎沙门菌基因组上的nmpC基因进行置换,通过PCR检测方法得出肠炎沙门菌nmpC基... 

【文章来源】：河北科技师范学院河北省

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

PCR扩增沙门菌nmpC基因Fig2-1TheamplificationofnmpCgeneinSalmonella

因和 pET-28a 质粒，分别用 BamHⅠ和 salⅠ进接转化入 DH5α感受态细胞中，通过 PCR 得到日，提取质粒进行测序，测序结果经 NCBI BL明 pET-28a-nmpC 表达载体构建成功。蛋白的原核表达及验证a-nmpC 重组载体以化学转化方法转入 BL21 工程37℃，诱导 5h，得到重组 His-NmpC（rNmpC） SDS-PAGE 电泳验证，结果（图 2-2）显示，在而空载对照没有出现条带。为了试验准确性，进一这一结果，以鼠源抗His标签单克隆抗体为一抗（P-IgG 为二抗（1:20000 稀释），结果（图 2-4）显带，与 SDS-PAGE 结果一致，说明得到表达重

Westernblot鉴定rNmpCFig2-3WesternblotidentificationofrNmpC

【参考文献】：
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硕士论文
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本文编号：2940642