烟酸对乳酸诱导的瘤胃上皮细胞凋亡的保护机制研究

发布时间：2020-12-28 16:02

　　瘤胃酸中毒是反刍动物生产中常见的一种营养代谢疾病,给养殖业带来巨大的损失。瘤胃酸中毒会引起瘤胃屏障结构破坏、功能丧失,增加瘤胃内有毒物质进入血液的途径,进而加重病症引发全身性代谢型酸中毒,但其发生机制尚不清楚,有待深入研究。有研究发现,瘤胃屏障结构的破坏可能与瘤胃上皮细胞过度凋亡有关。高浓度乳酸是引起急性瘤胃酸中毒发生的主要因素。但乳酸是否能诱导瘤胃上皮细胞凋亡还未见报道。烟酸是一种B族维生素,在缓解瘤胃酸中毒症状上有一定效果,但烟酸对瘤胃上皮细胞凋亡是否具有保护作用尚不清楚。本试验采用成年湖羊瘤胃上皮细胞作为试验对象,通过体外培养法研究乳酸及烟酸对瘤胃上皮细胞细胞活力、氧化还原状态、线粒体膜电位、凋亡及相关基因和蛋白的影响,探讨乳酸及烟酸对瘤胃上皮细胞凋亡的调控机制。通过MTT法检测细胞活力,Annexin V FITC/PI双染法检测细胞凋亡,荧光显微镜观察线粒体膜电位变化,流式细胞术测定细胞内活性氧及线粒体膜电位变化,实时荧光定量PCR及蛋白质免疫印迹试验分析细胞内凋亡相关基因及蛋白的相对表达水平。试验结果如下:（1）不同剂量抗生素处理对成年湖羊瘤胃上皮细胞原代培养结果的影响。通... 

【文章来源】：江西农业大学江西省

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
中英文名词对照表（Abbreviations）
第一部分 文献综述
    1 研究背景
    2 研究进展
        2.1 酸中毒对瘤胃上皮的影响
            2.1.1 乳酸在瘤胃中的代谢
            2.1.2 瘤胃乳酸酸中毒的发生机制
            2.1.3 瘤胃上皮的结构和功能
            2.1.4 瘤胃酸中毒对瘤胃上皮的影响
        2.2 细胞凋亡对瘤胃上皮的影响
            2.2.1 细胞凋亡概况
            2.2.2 细胞凋亡的特征
            2.2.3 细胞凋亡的诱导因素
            2.2.4 细胞凋亡的机制
            2.2.5 凋亡对上皮屏障的影响
        2.3 烟酸在反刍动物生产中的应用
            2.3.1 烟酸在瘤胃中的代谢
            2.3.2 烟酸对反刍动物营养的影响
            2.3.3 烟酸对瘤胃酸中毒的影响
        2.4 烟酸对细胞凋亡的调控
            2.4.1 DNA修复途径
            2.4.2 抗氧化途径
    3 研究目的和意义
    4 技术路线
第二部分 试验研究
    试验一 不同剂量抗生素处理对瘤胃上皮细胞原代培养结果的影响
        1 材料与方法
            1.1 材料
                1.1.1 主要试剂
                1.1.2 主要仪器
                1.1.3 组织来源
                1.1.4 细胞培养液的配制
                1.1.5 试验设计与分组
            1.2 试验方法
                1.2.1 瘤胃上皮组织的清洗
                1.2.2 细胞分离与培养
                1.2.3 细胞的纯化与传代
                1.2.4 细胞免疫化学法鉴定
                1.2.5 细胞生长活性检测
        2 结果分析
            2.1 不同剂量抗生素处理对瘤胃上皮细胞染菌及生长的影响
            2.2 细胞的纯化与传代
            2.3 细胞的免疫化学鉴定
            2.4 细胞生长活性检测
        3 讨论
        4 小结
    试验二 乳酸及添加烟酸对瘤胃上皮细胞活力的影响
        1 材料与方法
            1.1 材料
                1.1.1 主要试剂
                1.1.2 主要仪器
                1.1.3 细胞培养基的配制
            1.2 试验设计与分组
            1.3 测定项目与方法
                1.3.1 MTT法检测瘤胃上皮细胞活力
            1.4 统计分析
        2 结果分析
            2.1 不同浓度乳酸在不同时间对瘤胃上皮细胞相对活力的影响
            2.2 不同浓度烟酸在乳酸处理下对瘤胃上皮细胞相对活力的影响
        3 讨论
        4 小结
    试验三 乳酸及添加烟酸对细胞氧化还原状态及线粒体膜电位的影响
        1 材料与方法
            1.1 试验试剂与仪器
                1.1.1 主要试剂
                1.1.2 主要仪器
                1.1.3 细胞培养基的配制
            1.2 试验设计与分组
            1.3 测定项目和测定方法
                1.3.1 细胞内活性氧（ROS）的测定
                1.3.2 细胞内总抗氧化能力（Total-antioxidant capacity,T-AOC）的测定
                1.3.3 细胞内线粒体膜电位检测
            1.4 统计分析
        2 结果与分析
            2.1 乳酸及添加烟酸处理对瘤胃上皮细胞内活性氧产生的影响
            2.2 乳酸及添加烟酸处理对瘤胃上皮细胞内总抗氧化能力的影响
            2.3 乳酸及添加烟酸处理对瘤胃上皮细胞内线粒体膜电位的影响
        3 讨论
        4 小结
    试验四 乳酸及添加烟酸对瘤胃上皮细胞凋亡及相关基因和蛋白表达的影响
        1 材料与方法
            1.1 试验试剂与仪器
                1.1.1 主要试剂
                1.1.2 主要仪器
                1.1.3 细胞培养基的配制
            1.2 试验设计与分组
            1.3 测定项目和测定方法
                1.3.1 Annexin V FITC/PI双染法检测细胞凋亡
                1.3.2 RT-PCR检测凋亡相关基因mRNA表达
                1.3.3 细胞凋亡相关蛋白表达量的测定
            1.4 统计分析
        2 结果与分析
            2.1 乳酸及添加烟酸对瘤胃上皮细胞凋亡的影响
            2.2 乳酸及添加烟酸处理对瘤胃上皮细胞凋亡相关基因及蛋白相对表达量的影响
                2.2.1 乳酸及添加烟酸处理对Mct1、P53、PARP-1 mRNAs及蛋白相对表达量的影响
                2.2.2 乳酸及添加烟酸处理对Bcl-2、Bax mRNAs及蛋白相对表达量及Bcl-2/Bax比值的影响
                2.2.3 乳酸及添加烟酸处理对Cyt-C、AIF、caspase-9 mRNAs及蛋白相对表达量的影响
                2.2.4 乳酸及添加烟酸处理对Fas、caspase-8、caspase-3 mRNAs及蛋白相对表达量的影响
        3 讨论
            3.1 乳酸及添加烟酸对瘤胃上皮细胞凋亡的影响
            3.2 乳酸及添加烟酸对瘤胃上皮细胞内凋亡相关基因及蛋白相对表达量的影响
        4 小结
第三部分 全文结论、创新点和展望
    1 全文结论
    2 创新点
    3 展望
参考文献
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]丁酸对瘤胃上皮细胞生长和凋亡的影响[J]. 彭志鹏,罗丹,许超,熊小文,温庆琪,瞿明仁,欧阳克蕙.  江西农业大学学报. 2018(03)
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[7]乳酸抑制肿瘤坏死因子α诱导的仔猪空肠上皮细胞凋亡初探[J]. 陆相嵩,任晓明.  中国农学通报. 2015(11)
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博士论文
[1]亚急性瘤胃酸中毒对山羊瘤胃上皮屏障功能的影响及其机制[D]. 刘军花.南京农业大学 2014
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硕士论文
[1]烟酸调控高精料诱导瘤胃上皮细胞凋亡机制的研究[D]. 许超.江西农业大学 2017
[2]高乳酸通过线粒体通路损伤星形胶质细胞的实验研究[D]. 郭永真.宁夏医科大学 2017
[3]亚急性瘤胃酸中毒对奶山羊瘤胃上皮通透性及细胞连接蛋白表达的影响[D]. 程萌.内蒙古农业大学 2016
[4]烟酸对玉米和苜蓿瘤胃培养液氧化还原态及发酵指标的影响[D]. 陈伟.江西农业大学 2016
[5]亚急性瘤胃酸中毒对奶山羊瘤胃上皮屏障功能影响机制的研究[D]. 杨淑青.内蒙古农业大学 2014
[6]亚急性瘤胃酸中毒对瘤胃、瓣胃上皮细胞增殖与凋亡的影响[D]. 邬宇航.内蒙古农业大学 2013
[7]乳酸抑制LPS激活大鼠肠黏膜微血管内皮细胞NF-κB通路的研究[D]. 刘静.北京农学院 2011
[8]醋酸和乳酸对酵母细胞凋亡及相关基因表达的影响研究[D]. 卢丽.东北农业大学 2010



本文编号：2944030