鸡白痢沙门菌毒力相关基因缺失株的构建及免疫效力评价

发布时间：2020-12-29 00:31

　　鸡白痢沙门菌是当前危害我国养禽业的重要病原菌,每年均造成了较为严重的经济损失。《国家中长期动物疫病防治规划（2012-2020年）》明确要求实施鸡白痢净化工程,养殖企业主要采取血清学诊断方法进行鸡白痢的检疫,淘汰阳性鸡达到净化鸡群的目的。疫苗可作为净化的辅助手段,其中减毒活疫苗与灭活疫苗和亚单位疫苗相比,不仅具有持久刺激机体产生体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫应答的特点,还可以通过基因缺失策略设计为区分自然感染与疫苗免疫动物的DIVA疫苗,这对种群中鸡白痢的净化具有重要意义,显示出广阔的应用前景。我们在前期研究构建的鸡白痢沙门菌aroA基因缺失株S004AaroA基础上,运用λ-Red同源重组的方法进一步成功构建了鸡白痢沙门菌spB、crp和rfaG基因的多基因缺失株,并通过对其生物学特性、致病性和免疫效力进行评价,筛选出较理想的减毒疫苗候选株,为进一步研发鸡白痢沙门菌减毒疫苗奠定基础。1.鸡白痢沙门茵spB、crp和rfaG基因缺失株的构建及生物学特性的测定选择与鸡白痢沙门菌侵袭力和耐高渗能力相关的基因sipB、与菌毛表达相关的基因crp和与脂多糖合成相关的基因rfaG设计引物,以S00... 

【文章来源】：扬州大学江苏省

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－１冲５和ｃｒｐ基因的ＰＣＲ扩增??Ｆｉｇ．?１－１?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ｓｉｐＢ?ａｎｄ?ｃｒｐ?ｇｅｎｅｓ??Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｒ

缺失株在不添加葡萄糖的ＬＢ培养基中，生长速度较野生株减缓，且生长速度在??添加葡萄糖后得到回升，在葡萄糖浓度达到〇．〇５％后，可以达到和野生株Ｓ００４??相近水平（图１－８？１０）。??１?ｇ??，?？?Ｓ００４??＾?Ｓ０（Ｍ＾ｃｒｐ＋ＬＢ??ｇ?１２＂?Ｓ００４Ａｃｒｐ＋０．０１％Ｇ?ＬＢ??Ｉ?１?°＇?？＊？？酿?Ａｃｒｐ＋０?０５％Ｇ?ＬＢ??〇?Ｓ｛ＫＭ＾ｃｒｐ＋０，０８％Ｇ?Ｌ８??°?°６＇?—■夸?Ｓ００４Ａｃｒｐ＋０．１％ＧＬＢ??°４＇?－ｍ－?Ｓ００４Ａｃｒｐ＋０．５％Ｇ?ＬＢ??０．２．??０．０１ｊｊ?ｖｖ；＇＇？＇＃Ｌ－ｉ＂，ｖ－ＬＵ，ｖ＇ｖ＇ｉｒｎ?ｉｋｕｕｊ＂ｕ－ｉｉｊｕ；ｊａｖｒ．…－＊．．．．．．．．．．．．．?ｉ??＼??〇?２?４?Ｓ?８?１０?１２??Ｔｌｍａ／ｈ??图ｌ－８Ｓ０

??图１－１４?Ｓ００４Ａｗ＾ＡｃｒｐＡｒ／ａＧ和Ｓ００４Ａ＾＾４Ａ冲５Ａｒ／ａＧ基因缺失突变株传代ＰＣＲ鉴定图??Ｆｉｇ．?１－１４?Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｓｔａｂｉｌｉｔｙ?ｏｆ?ＳＯＯＡＡａｒｏＡＡｓｉｐＢＡｒｆａＧ?ａｎｄ?Ｓ００４ＡａｒｏＡＡｃｒｐＡｒｆａＧ?ｇｅｎｅ??ｄｅｌｅｔｉｏｎ?ｍｕｔａｎｔｓ?ｂｙ?ＰＣＲ??Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ；?１，７：?Ｓ００４?ｗｉｌｄ?ｔｙｐｅ：?１２８４?ｂｐ??２？６：?Ｔｈｅ?ａｍｐｌｉｆｉｅｄ?ｆｒａｇｍｅｎｔｓ?ｏｆ?ａｒｏｊ?ｇｅｎｅ?ｉｎ?Ｓ００４Ａａｒａ４ＡｃｒｐＡ吻Ｇ?７０－５０：?４４２?ｂｐ；??８？１２：?Ｔｈｅ?ａｍｐｌｉｆｉｅｄ?ｆｒａｇｍｅｎｔｓ?ｏｆ?ａｒａｊ?ｇｅｎｅ?ｉｎ?ＳＯＣＭＡａ／＾＾Ａｓ＾＾Ａ／＾Ｇ１?坪從广“＂０／７?／０－５０：?４４２ｂｐ??３．３．５上皮细胞的黏附与入侵试验??当ＨｅＬａ细胞形成单层后，以１００ＭＯＩ的接种量接种野生株Ｓ００４和基因突??变株?Ｓ００４Ａａｒ〇ｙ４、Ｓ００４ＡａｒａＪＡ５７＞５、Ｓ００４ＡａｒｏＪＡｃｒｐ、ＳＣＫＭＡａｒａＪＡ＾ｂＳＡ响Ｇ??和Ｓ００４ＡａｒａＪＡｃｒ／７Ａｒ／ａａ进行上皮细胞的黏附与入侵试验；与野生株Ｓ００４相??比，带有＿５基因的缺失株黏附与入侵率均极显著降低（Ｐ＜０．０１），?Ｓ００４ＡａｒｏＪ??单基因缺失株和Ｓ００４Ａａｒａ４Ａａｐ的黏附与侵入能力与野生株相比均无显著差异??（？＞０．０５），?Ｓ００４／Ｗ？＾Ａｃｒ／？、Ｓ００４ＺＷｒｏｄＡｃｒ；７Ａｒ／ａＣ７?缺失株黏附的黏附率较野生??株下降了?５２．３２％


本文编号：2944652