动物性食品中三聚氰胺、地昔尼尔、环丙氨嗪检测方法的研究

发布时间：2020-12-29 06:46

　　本研究建立了牛奶中三聚氰胺、地昔尼尔、环丙氨嗪的高效液相色谱-串联质谱检测法（HPLC-MS/MS）。用1%三氯乙酸-乙腈溶液将牛奶中的蛋白沉淀,将目标分析物提取出来,通过强阳离子固相萃取柱对目标分析物进行富集净化后,最后用Waters超高效液相色谱-串联质谱仪对三聚氰胺、地昔尼尔、环丙氨嗪残留含量进行标准检测,色谱柱采用Acquity HSS T3（2.1mm×50mm,1.7μm）,以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,外标法定量,并且对牛奶样品的前处理方法及三聚氰胺、地昔尼尔、环丙氨嗪的液相色谱和质谱条件进行优化。结果表明,本研究建立的牛奶中三聚氰胺、地昔尼尔、环丙氨嗪的高效液相色谱-串联质谱检测法。三聚氰胺、地昔尼尔和环丙氨嗪的定性限分别为0.02、0.01、0.01 mg/kg,定量限分别为0.06、0.03、0.03 mg/kg,添加回收率在94%-104%之间,满足残留检测方法的回收率在60%-120%的要求。该方法灵敏、稳定,能同时对牛奶中三聚氰胺、地昔尼尔和环丙氨嗪进行定性、定量分析。此外,本研究还建立了羊组织和羊奶中地昔尼尔的间接性酶联免疫吸附检测法（En... 

【文章来源】：北京农学院北京市

【文章页数】：38 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

三聚氰胺、环丙胺嗪、地昔尼尔结构式

2.3 结果与分析2.3.1 样品处理条件的选择2.3.1.1 提取溶剂的选择已报道三聚氰胺提取液有稀盐酸、20%二乙胺、磷酸盐缓冲液(pH2)、1%三氯乙酸。由于地昔尼尔、环丙氨嗪与三聚氰胺的结构非常接近，都具有三嗪母核，母核上氢被氨基取代，而呈现碱性，考虑到同时检测三种化合物故选用 1%三氯乙酸-乙腈提取。2.3.1.2 质谱条件优化采用两步法对质谱条件进行优化，第一步在正离子模式下，以蠕动泵进样的方式，对 1μg/mL的三聚氰胺、地昔尼尔和环丙氨嗪标准溶液进行母离子全扫描，确定三聚氰胺、地昔尼尔和环丙胺嗪的准分子离子量，第二步以三聚氰胺、地昔尼尔和环丙胺嗪三种药物的准分子离子为母离子，对其子离子进行全扫描。本研究已代表性药物地昔尼尔为例，采用两步法对地昔尼尔的质谱条件进行优化，三聚氰胺和环丙氨嗪的操作方法与地昔尼尔的操作方法一致。

（波长 nm）图 5 地昔尼尔，OVA 和地昔尼尔-OVA 的紫外扫描光谱图Figure 5.Dicyclanil;OVA and Dicyclani-OVA UV scanning spectrogram..2 标准曲线及灵敏度和检出限本研究建立的 ELISA 法是一种半定量的方法，它也是第一个在动物组织中检测地昔尼尔用饱和硫酸铵沉淀法纯化抗血清后，再用紫外光谱法测定，抗体浓度为 22mg /mL。包被选择的抗体的最佳稀释度分别为 1.0ng /mL 和 1：20000,在 9ng /mL 时，抗体对地昔尼尔的抑制浓度（IC50）的高度敏感性;校准抑制曲线为 y = 96.32-49.23log x（R2= 0.9712）（图分别为 20％和 80％的较低和较高的抑制截止值，相应的定量范围是 2-35ng /mL。


本文编号：2945209