重组腐败梭菌α毒素突变体的生物学特性及免疫原性研究

发布时间：2020-12-29 13:49

　　腐败梭菌（Clostridium septicum）是人气性坏疽和动物恶性水肿的主要病原,也是羊快疫的病原,其产生的α毒素（Clostridium septicum alpha toxin,CSA）是其主要的致病因子和免疫原。由该菌引起的羊快疫发病急,往往来不及治疗发病动物即行死亡,因此疫苗免疫是预防该病的唯一有效措施。预防该病的疫苗均由腐败梭菌强毒培养物经甲醛灭活脱毒制成菌体-类毒素疫苗,由于生产过程中需要培养大量的强毒菌液,存在着一定生物安全隐患。因而,无毒重组腐败梭菌α毒素疫苗已成为新型疫苗的研制热点。本研究依据大肠杆菌偏爱的密码子,优化合成包含信号肽的腐败梭菌α毒素全基因并连接至pEZ-clone质粒,以该质粒为模板采用OEPR（Overlap Extension PCR and Recombination）法构建了表达CSA的重组质粒pET28a-csa,以pET28a-csa为模板,利用点突变技术,成功构建7个不同腐败梭菌α毒素突变体的表达载体(pET28a-csa_C86L、pET28a-csa_Y118T、pET28a-csa

【文章来源】：中国兽医药品监察所北京市

【文章页数】：82 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

本研究拟构建的重组腐败梭菌α毒素突变表达载体的基因示意图

腐败梭菌α毒素基因的PCR扩增产物M：DL2000Marker，1：毒素PCR产物

达载体 pET 28a-csa 的构建法以pET-28a空质粒为模板，以含有载体同源臂的csa片段为csa基因片段构建至pET-28a载体上，pET28a-csa质粒大小，与预期大小相符。图 2.3 腐败梭菌 α 毒素基因的 PCR 扩增产物M：DL2000 Marker，1： 毒素 PCR 产物

【参考文献】：
期刊论文
[1]重组大肠杆菌E. coli BL21/pET28a（+）-mle产苹果酸乳酸酶发酵条件的优化[J]. 胡兰兰,田亚楠,陈福生,张秀艳.  中国酿造. 2018(06)
[2]抗菌肽SMAP-29在大肠杆菌中表达条件的优化及纯化研究[J]. 吴三桥,赵冠杰,万健,陈琛.  江苏农业科学. 2018(09)
[3]腐败梭菌α毒素重组突变体的免疫保护力评价[J]. 杜吉革,薛麒,朱真,李启红,印春生,彭小兵,姚文生,康凯,陈小云.  中国兽医科学. 2018(09)
[4]探索不同培养条件对大肠杆菌表达蛋白的影响[J]. 白子上,曹湜欧,吴重玺,范家齐,和渊.  生物学通报. 2018(04)
[5]羊快疫的诊治[J]. 李向军,常伦胜,黄江,王强.  养殖与饲料. 2017(12)
[6]腐败梭菌引起的羊疫病防治[J]. 丁环.  山东畜牧兽医. 2017(06)
[7]猪腐败梭菌感染引起猝死病例的病理学观察[J]. 曹禹,高国强,周玉龙,周金玲,范春玲,吴丹丹.  黑龙江畜牧兽医. 2017(17)
[8]串联杂种泛素结合结构域蛋白(ThUBD)在大肠杆菌中的可溶性高效表达[J]. 罗维佳,邓晨,李衍常,高媛,徐平.  军事医学. 2016(10)
[9]牛恶性水肿及其防治[J]. 赵宏志.  中国畜牧兽医文摘. 2014(03)
[10]羊快疫的诊断与防治措施[J]. 刘玉福.  养殖技术顾问. 2013(03)

硕士论文
[1]猪圆环病毒2型Cap蛋白在大肠杆菌中的表达[D]. 刘凤.内蒙古农业大学 2018
[2]重组腐败梭菌α毒素的免疫原性研究[D]. 彭国瑞.中国兽医药品监察所 2014
[3]鹿巴氏杆菌与腐败梭菌混合感染的诊断与治疗[D]. 谭仕旦.华中农业大学 2007
[4]腐败梭菌α毒素基因克隆和表达的研究[D]. 张燕.河北师范大学 2006



本文编号：2945747