结核杆菌部分保护性抗原基因的克隆及MPT-64的原核表达

发布时间：2021-01-04 12:22

　　目的：结核病是由结核杆菌引起的慢性传染病。结核杆菌可以通过多种途径侵入人体全身各个器官，但其主要侵犯肺脏，称为肺结核病。目前我国是世界上受结核病影响最严重的国家之一，一直极为重视结核病的预防和治疗。现阶段我国对结核病的预防普遍通过注射卡介苗（BCG）来实现，但由于卡介苗一定程度上存在免疫缺失，预防效果不尽如人意。与此同时，在结核病诊断中常用的ELISA反应准确性不高。寻找新型诊断或治疗方法，开发相应产品就显得尤为重要。现阶段，已有一定数量的科研人员开始着手运用融合蛋白[1]检测结核病抗体。本实验选取并克隆部分结核分枝杆菌的保护性抗原基因。并从中选取MPT-64基因，将其转入原核感受态细胞中进行表达，以获得MPT-64融合蛋白，为结核病诊断、疫苗开发奠定实验基础。方法：选取结核杆菌保护性抗原基因Ag85a、Ag85b、MPT-63、MPT-64、CFP-10、CFP-21、TB10.4、ESAT-6，为8种结核杆菌保护性抗原基因设计引物并进行PCR扩增。从中选取结核杆菌保护性抗原基因MPT-64，构建重组质粒pET-32a-MPT-64，并通过原核细胞对重组质粒进行表达，从而获取融合蛋白... 

【文章来源】：吉林农业大学吉林省

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
前言
第一章 文献综述
    1.1 结核病新疫苗的研究进展
        1.1.1 现阶段 BCG 在抗结核病过程中的缺陷
        1.1.2 新疫苗的研发现状
        1.1.3 目前新疫苗研究存在的问题[14]
    1.2 microRNA 在疾病诊断方面的应用
        1.2.1 血清 microRNA 在疾病诊断方面的应用
        1.2.2 血浆 miRNA 在疾病诊断中的应用
        1.2.3 microRNA 在结核病诊断方面的应用
第二章 实验研究
    2.1 结核分枝杆菌部分保护性基因的克隆
        2.1.1 材料
        2.1.2 方法
        2.1.3 结果与分析
    2.2 结核分枝杆菌保护性基因 MPT64 在大肠杆菌中的表达
        2.2.1 材料
        2.2.2 方法
        2.2.3 结果与分析
第三章 讨论
    3.1 结核杆菌抗原保护性基因的选择
    3.2 载体的选择及诱导条件优化
    3.3 microRNA 在结核病诊断中的应用
第四章 结论
参考文献
作者简介
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]血浆miR-122作为药源性肝损伤生物标志物的研究及应用[J]. 汤纳平,王雁,马璟.  中国药理学与毒理学杂志. 2013(03)
[2]microRNA-183家族的表达在肝细胞癌临床诊断中的价值[J]. 邱历伟,吴玮,赛文莉,杨君伶,张海健,顾星,时运,陆少林,姚登福.  世界华人消化杂志. 2013(16)
[3]Micro-RNA-122在不同时期慢性乙肝患者外周血浆中表达变化的研究[J]. 李祥云,陈兆军,潘峰,刘玉华,黄玲玲,楼洪萍.  中国卫生检验杂志. 2013(04)
[4]对研发新型结核病疫苗的分析和展望[J]. 王秉翔.  微生物学免疫学进展. 2012(02)
[5]牛结核病疫苗的最新研究进展[J]. 阿曼古丽·加孜,古丽娜尔·沙哈巴.  新疆畜牧业. 2012(02)
[6]血清miR-375水平可能是胃远端腺癌的标志物[J]. 张文辉,桂俊豪,王昌正,常青,吴本俨.  中华保健医学杂志. 2011(05)
[7]四种方法对肺结核诊断价值的研究分析[J]. 孙文芹,吕建晓,李桂兰.  中国实用医药. 2011(04)
[8]牛分枝杆菌mpb51-63融合基因的克隆及其原核表达[J]. 李璐璐,王春芳,任飞,刘新宇,宁浩然,刘磊,李冰洁,姜秀云,何昭阳.  中国预防兽医学报. 2010(11)
[9]结核抗体对肺结核诊断价值[J]. 付茂英,顾雪峰,倪慧慧.  中华实用诊断与治疗杂志. 2008(09)
[10]牛分枝杆菌特异性四联融合蛋白在牛结核病诊断中的临床应用[J]. 吴波,张书环,邓铨涛,项杰,陈军,刘朝,陈鑫,韩永佩,赵波,陈焕春,郭爱珍.  中国人兽共患病学报. 2007(11)

博士论文
[1]乙肝相关肝细胞癌FFPE组织及血清中microRNA表达及其与肝癌预后的研究[D]. 朱海涛.复旦大学 2011
[2]miRNA-375在胃癌中的功能及作用机制[D]. 徐艳珺.浙江大学 2011

硕士论文
[1]5种血清microRNA作为胃癌诊断标志物的研究[D]. 李构.南京大学 2012



本文编号：2956756