牛分枝杆菌黏附素HBHA-HSP65的串联原核表达及其免疫保护力评价

发布时间：2021-01-05 14:27

　　牛结核病（Bovine tuberculosis）是由牛分枝杆菌（Mycobacterium bovis）引起的一种慢性传染性人兽共患病，被世界动物卫生组织（OIE）列为必报传染病，我国将其列为二类动物疫病。我国是全球第二大结核病高负担国家，卡介苗（BCG）是目前唯一可用的疫苗，但是无法区别是自然感染还是人工免疫，因此研发牛结核病的新型疫苗已成为控制牛结核病的迫切需求。HBHA和HSP65是结核分枝杆菌的主要黏附素。本文主要研究内容：（1）黏附素HBHA、HSP65（Cpn60.2）的串联表达。PCR扩增HSP65和HBHA基因，大小分别约为1600bp和600bp，采用SOE技术串联HBHA-HSP65，经测序鉴定，构建重组质粒pET-HSP65、pET-HBHA和pET-HBHA-HSP65，转化至E.coli BL21（DE3），IPTG诱导表达，经SDS-PAGE分析，表达蛋白的分子量分别为65ku、28ku、95ku，主要以可溶状态表达。经过提纯后蛋白浓度分别为2.32mg/mL，1.98mg/mL，2.14mg/mL。经Western-blot分析，均能够被牛结核病阳性血清... 

【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

目的基因的PCR扩增产物Fig.l-1PCRproductoftargetgene7)T.5(1iV(37)NA.marker7-HSPF.S-3NRHA-4-HRHA-HSP55

202.3 目的基因的序列测定分析经酶切分析和 PCR 鉴定的重组质粒送至上海生工公司进行测序。测序结果表明，HSP65、HBHA 和融合基因 HBHA-HSP65 的基因序列测定结果经过 DNASTAR 软件比对，未发现融合基因发生点突变；重组基因片段测序也与目的序列完全一致。

202.3 目的基因的序列测定分析经酶切分析和 PCR 鉴定的重组质粒送至上海生工公司进行测序。测序结果表明，HSP65、HBHA 和融合基因 HBHA-HSP65 的基因序列测定结果经过 DNASTAR 软件比对，未发现融合基因发生点突变；重组基因片段测序也与目的序列完全一致。

【参考文献】：
期刊论文
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[3]人兽共患病专题讲座 人兽共患病的现状与防制（三）——动物结核病[J]. 金鑫,苏敬良.  动物保健. 2004(06)
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本文编号：2958831