日本血吸虫表膜蛋白dysferlin和myoferlin的初步研究

发布时间：2021-01-06 12:02

　　日本血吸虫病是一种危害严重的人畜共患寄生虫病。除了人以外，还有40多种家畜以及野生动物是日本血吸虫的储存宿主。目前，对血吸虫病的防控主要基于药物治疗受感染的人和家畜，然而，由于重复感染严重，单靠药物治疗并不能阻断血吸虫病传播。因此，血吸虫病疫苗研究是目前防控血吸虫病的重要科技需求。日本血吸虫的体被是其与宿主相互作用的主要界面，对日本血吸虫的生长发育具有重要的作用，分布于体被上的表膜蛋白是研发疫苗和药物的理想靶标。本实验室前期应用蛋白组学技术系统分析了不同发育时期日本血吸虫体被表膜蛋白，发现ferlin蛋白家族中的dysferlin及myoferlin蛋白存在于日本血吸虫的多个发育时期，推测它在血吸虫寄生生活中可能起着重要作用。为探讨这两个基因的序列特征和表达特性，评估其作为疫苗候选分子的潜力，本文开展了以下研究。1.日本血吸虫表膜蛋白myoferlin（SjMF）的初步研究利用PCR技术首次扩增日本血吸虫SjMF基因，获得了963bp的cDNA序列，构建了重组表达质粒pET-32a（+）-SjMF，并在大肠杆菌中成功表达，重组蛋白rSjMF分子量约62kDa。实时定量PCR分析显示Sj... 

【文章来源】：中国农业科学院北京市

【文章页数】：91 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 引言
    1.2 血吸虫病防治
        1.2.1 血吸虫病综合防治
        1.2.2 血吸虫病的药物治疗
        1.2.3 血吸虫病的疫苗研究
    1.3 日本血吸虫的体被及体被蛋白
        1.3.1 体被结构与功能
        1.3.2 重要的体被蛋白
        1.3.3 质膜修复机制的研究
第二章 日本血吸虫表膜蛋白 SjMF 的初步研究
    2.1 引言
    2.2 试验材料
        2.2.1 生物材料
        2.2.2 主要仪器设备
        2.2.3 主要试剂
        2.2.4 试剂配制
    2.3 试验方法
        2.3.1 日本血吸虫虫体收集
        2.3.2 日本血吸虫 cDNA 制备
        2.3.3 日本血吸虫 SjMF 基因的克隆及生物信息学分析
        2.3.4 目的基因序列保守性分析
        2.3.5 荧光实时定量 PCR 分析 SjMF 在不同期别虫体中的转录水平差异
        2.3.6 重组质粒 pET-32a（+）-SjMF 的构建与鉴定
        2.3.7 重组蛋白 rSjMF 的制备
        2.3.8 Western-blot 检测重组蛋白的抗原性
        2.3.9 SjMF 蛋白的组织定位
        2.3.10 重组蛋白 rSjMF 免疫保护效果评估
        2.3.11 重组蛋白 rSjMF 诱导的免疫应答分析
        2.3.12 不同剂量吡喹酮对 SjMF 基因转录水平的影响
        2.3.13 RNAi 体外抑制日本血吸虫 SjMF 基因
        2.3.14 统计学分析
    2.4 试验结果
        2.4.1 日本血吸虫 SjMF 基因的克隆及生物信息学分析
        2.4.2 目的基因序列保守性分析
        2.4.3 实时定量 PCR 分析 SjMF 在不同期别虫体中的转录水平差异
        2.4.4 重组质粒 pET-32a（+）-SjMF 的构建与鉴定
        2.4.5 重组蛋白 rSjMF 的表达及纯化
        2.4.6 Western-blot 检测重组蛋白的免疫原性
        2.4.7 SjMF 蛋白的组织定位
        2.4.8 重组蛋白 rSjMF 免疫保护效果评估
        2.4.9 重组蛋白 rSjMF 诱导的免疫应答分析
        2.4.10 不同剂量吡喹酮对 SjMF 基因转录水平的影响
        2.4.11 RNAi 体外抑制日本血吸虫 SjMF 基因
    2.5 讨论
第三章 日本血吸虫表膜蛋白 SjDF 的初步研究
    3.1 引言
    3.2 试验材料
        3.2.1 生物材料
        3.2.2 主要仪器设备
        3.2.3 主要试剂
        3.2.4 主要试剂及其配制
    3.3 试验方法
        3.3.1 日本血吸虫 SjDF 基因的克隆及生物信息学分析
        3.3.2 目的基因序列保守性分析
        3.3.3 实时定量 PCR 分析 SjDF 在不同期别虫体中的转录水平差异
        3.3.4 重组质粒 pET-28a（+）-SjDF 的构建与鉴定
        3.3.5 重组蛋白 rSjDF 的制备
        3.3.6 Western-blot 检测重组蛋白的抗原性
        3.3.7 SjDF 蛋白的组织定位
        3.3.8 重组蛋白 rSjDF 诱导的免疫应答分析
        3.3.9 不同剂量吡喹酮对 SjDF 基因转录水平的影响
        3.3.10 统计学分析
    3.4 试验结果
        3.4.1 日本血吸虫 SjDF 基因的克隆及生物信息学分析
        3.4.2 目的基因序列保守性分析
        3.4.3 荧光实时定量 PCR 分析 SjDF 在不同期别虫体中的转录水平差异
        3.4.4 重组质粒 pET-28a（+）-SjDF 的构建与鉴定
        3.4.5 重组蛋白 rSjDF 的表达及纯化
        3.4.6 Western-blot 检测重组蛋白的免疫原性
        3.4.7 SjDF 蛋白的组织定位
        3.4.8 重组蛋白 rSjDF 诱导的免疫应答分析
        3.4.9 不同剂量吡喹酮对 SjDF 基因转录水平的影响
    3.5 讨论
第四章 全文总结
参考文献
致谢
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]日本血吸虫体表蛋白rSj29的保护性效果[J]. 陈虹,傅志强,陈雷,邱春辉,付光伟,李晔,邵东华,冯新港,林矫矫.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2009(06)
[2]日本血吸虫体表蛋白Tetraspanin 2-A核酸疫苗的构建及其对小鼠的免疫试验[J]. 张鹏,张薇娜,任翠平,刘淼,沈际佳.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2009(06)
[3]Dysferlin在子痫前期胎盘中的表达[J]. 黄小玲,王自能.  实用医学杂志. 2009(11)
[4]青蒿素类药物的药理作用研究进展[J]. 谭涛,秦宗会,谭蓉.  中国药业. 2009(03)
[5]分子克隆实验指南精编版[J]. 黄培堂.  生物技术通讯. 2008(06)
[6]吡喹酮处理日本血吸虫成虫蛋白质组学分析[J]. 张玲,刘峰,崔书健,徐斌,周晓农,胡薇.  中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2008(04)
[7]血吸虫病免疫病理研究进展[J]. 马铁军,王坤平,顿国栋,张锡林.  热带医学杂志. 2008(05)
[8]我国血吸虫病现状及治疗药物[J]. 李岩,周艺.  畜牧兽医杂志. 2007(01)
[9]日本血吸虫病疫苗研究进展[J]. 辛晓芳,朱荫昌,王国治.  中国血吸虫病防治杂志. 2006(05)
[10]一种新型日本血吸虫疫苗(童虫活细胞)诱导小鼠产生有效保护性免疫力的研究[J]. 曾庆仁,林雪迟,龚燕飞,沈杰,张祖萍,蔡力汀,言敢威.  中国现代医学杂志. 2004(14)

博士论文
[1]日本血吸虫多表位疫苗构建探索和TSP-2抗原鉴定[D]. 蔡鹏飞.中国协和医科大学 2008

硕士论文
[1]日本血吸虫体被表膜蛋白分析及表膜蛋白SjNPP-5的初步研究[D]. 张旻.中国农业科学院 2011
[2]日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶（SjTGR）的克隆、表达及免疫保护效果的初步评估[D]. 韩艳辉.南京农业大学 2010
[3]Dysferlin等蛋白在前列腺癌中表达及意义的研究[D]. 王艺昧.吉林大学 2008



本文编号：2960532