CREBZF/Zhangfei在小鼠卵巢颗粒细胞凋亡调控中的作用

发布时间：2021-01-10 12:09

　　哺乳动物的卵泡发育是一个复杂的动态变化的过程,在一个发情周期中,卵泡发育成熟排卵,之后形成黄体的过程是在多种激素、生长因子和细胞因子作用下完成的,卵泡发育过程中,多数卵泡会由于优势选择而闭锁,只有少量的卵泡发育成熟直到排卵,而卵泡的闭锁过程实际上就是卵泡内颗粒细胞的凋亡过程。研究表明,内质网应激（ER stress）相关分子伴侣参与调节卵泡的发育过程并起到重要的作用,然而其具体的作用机制仍不明确。CREBZF/Zhangfei（SMILE-L/SMILE-S）是在研究宿主细胞因子HCF-1时发现的一种碱性亮氨酸拉链（basic region leucine zipper,bZIP）转录因子,早先的研究发现CREBZF在哺乳动物体多数组织中均有表达,并参与调节生理、病理过程。研究表明CREBZF/Zhangfei能够与多种内质网应激相关蛋白相互作用,对调控内质网应激起到重要作用。本研究利用免疫组化、干扰慢病毒技术、RT-PCR、Western Blot、流式细胞术等方法对CREBZF/Zhangfei在不同发育时期的小鼠卵巢中的表达定位和表达规律进行检测,并深入研究了CREBZF/Zha... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一部分 文献综述
    第一章 卵泡发育及闭锁和颗粒细胞
        1.1 卵泡发育及闭锁
        1.2 颗粒细胞
            1.2.1 颗粒细胞在卵泡发育中的作用
            1.2.2 颗粒细胞的凋亡引起卵泡闭锁
    第二章 内质网应激诱导细胞凋亡和Zhangfei的研究进展
        2.1 内质网应激
        2.2 细胞凋亡
        2.3 内质网应激参诱导细胞凋亡的研究进展
            2.3.1 PERK通路在内质网应激诱导细胞凋亡过程中的作用
            2.3.2 IRE1通路在内质网应激诱导凋亡过程中的作用
            2.3.3 内质网应激和BCL-2 家族蛋白
            2.3.4 内质网应激和MAPK信号通路
        2.4 Zhangfei的生物学特性及其在内质网应激中的作用
            2.4.1 Zhangfei的发现
            2.4.2 CREBZF/Zhangfei在内质网应激中的作用
第二部分 试验研究
    第三章 CREBZF/Zhangfei在小鼠卵巢组织中的表达规律及定位
        3.1 实验材料
            3.1.1 主要试剂
            3.1.2 主要仪器
            3.1.3 实验动物
        3.2 试验方法
            3.2.1 雌鼠卵巢石蜡切片的制备
            3.2.2 免疫组化染色
            3.2.3Western Bolt检测
        3.3 试验结果
            3.3.1 CREBZF/Zhangfei在不同发情时期小鼠卵巢中的表达分布
            3.3.2 Western Blot检测不同发情时期小鼠卵巢CREBZF/Zhangfei的表达
            3.3.3 Western Blot检测人工诱导卵泡发育过程中不同时间小鼠卵巢CREBZF/Zhangfei的表达变化
        3.4 讨论
        3.5 小结
    第四章 CREBZF/Zhangfei基因慢病毒干扰及过表达载体的扩增和病毒颗粒包装
        4.1 实验材料
            4.1.1 感受态细菌、质粒、细胞
            4.1.2 主要试剂
            4.1.3 主要仪器
        4.2 试验方法
            4.2.1 CREBZF/Zhangfei基因慢病毒干扰和过表达载体的扩增和鉴定
            4.2.2 用于病毒颗粒包装的HEK 293T细胞的准备
            4.2.3 慢病毒颗粒的包装和浓缩
            4.2.3 病毒滴度的测定
        4.3 试验结果
            4.3.1 CREBZF/Zhangfei基因慢病毒干扰和过表达载体鉴定
            4.3.2 检测重组质粒的转染
            4.3.3 慢病毒滴度测定
        4.4 讨论
        4.5 小结
    第五章 CREBZF/Zhangfei对小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的调控作用
        5.1 实验材料
            5.1.1 实验动物
            5.1.2 实验试剂
            5.1.3 实验仪器
        5.2 试验方法
            5.2.1 实验小鼠的处理
            5.2.2 小鼠卵巢颗粒细胞的采集和培养
            5.2.3 慢病毒颗粒感染小鼠卵巢颗粒细胞
            5.2.4 小鼠卵巢颗粒细胞凋亡率检测
            5.2.5 小鼠卵巢颗粒细胞蛋白提取及凋亡相关因子的检测
        5.3 试验结果
            5.3.1 小鼠卵巢颗粒细胞体外培养
            5.3.2 慢病毒感染小鼠卵巢颗粒细胞
            5.3.3 慢病毒颗粒的过表达和干扰效率测定
            5.3.4 干扰和过表达CREBZF/Zhangfei对小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响
        5.4 讨论
        5.5 小结
结论
参考文献
附录
缩略词
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]Zhangfei在小鼠动情周期卵巢和子宫中的分布[J]. 乔海娇,林鹏飞,王爱华.  动物医学进展. 2011(12)

博士论文
[1]Zhangfei基因在细胞内质网应激反应中的生物功能研究[D]. 张亚妮.西北农林科技大学 2010

硕士论文
[1]小鼠Zhangfei基因过表达和shRNA干扰慢病毒载体的构建和鉴定[D]. 陈风雷.西北农林科技大学 2013
[2]Zhangfei蛋白在小鼠发情周期卵巢及子宫中的表达[D]. 乔海娇.西北农林科技大学 2011



本文编号：2968679