应用类转录激活因子效应物核酸酶（TALEN）定点修饰猪基因组
发布时间：2021-01-10 12:15
20世纪80年代基因打靶技术的兴起极大地推动了发育生物学的研究和生物医药的开发，基因研究从最初的测序和图谱绘制逐渐发展为基因功能研究与基因致病机制解析，使现代生物学及医学研究取得了突破性进展。长期以来基因打靶技术主要在小鼠上完成，这是因为小鼠的胚胎干细胞能在体外培养并无限增殖，同时保持生殖系嵌合能力。但是利用小鼠制备的人类疾病模型往往不能真实反映人类疾病的发生和发展，甚至在诸多疾病中其症状与人类截然不同，人们一直在寻找与人的解剖和生理更为接近的大动物作为人类疾病的动物模型。在大动物中,猪在生理结构、生化特征以及营养代谢等方面与人更为接近，被认为是目前比较理想的大动物基因修饰模型。自2000年PPL公司成功利用体细胞核移植技术制备克隆猪以来，基因修饰猪在异种器官移植研究、人类疾病模型以及农业品种改良中取得了一系列突破性成果。但是由于猪胚胎干细胞的缺乏，目前只能对体细胞进行基因打靶修饰结合核移植技术来制备基因修饰猪。而体细胞在体外培养增殖速度慢而且增殖能力有限，常规同源重组进行基因打靶的效率极低。目前，只有少量文章报道了基因修饰猪的研究。因此，基因打靶技术的研发和改进是加快基因修饰猪研究发...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：135 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
载体构建流程图
图 1.2 位点特异性 TALEN 构建流程图Fig1.2 Construction of the TALEN vector1）根据设计的 TALEN 靶位点序列，将第 1-10 碱基对应的 RVD 模块和pFUS-A 依次加入 A 管中，第 11-（N-1）碱基个 RVD 模块和 pFUS-B（N-1）依次加入 B 管中，连接反应体系见表 1.5。表 1.5 连接反应体系Tab1.5 Ligation systemComponent AmountEach RVD module vector 1μL(150ng)pFUS-A/pFUS-B 1μL(150ng)10×T4 DNA ligase buffer 2μL
引物序列（5’- 3’）TTGGCGTCGGCAAACAGTGGGGCGACGAGGTGGTCGTTGG测 TALEN 活性体系构建le-strand annealing, SSA)是一种常用的色荧光蛋白 EGFP 作为报告基因。检测整的同源 EGFP 片段,2 个片段之间被终 TALEN 将靶位点双链 DNA 切割后，性获得完整的 EGFP 序列，使绿色荧此，通过比较使用 TALEN 前后绿色荧外活性进行检测。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Rapid and Cost-Effective Gene Targeting in Rat Embryonic Stem Cells by TALENs[J]. Charles Ashton. 遗传学报. 2012(06)
[2]Efficient and Specific Modifications of the Drosophila Genome by Means of an Easy TALEN Strategy[J]. Jiyong Liu~a,Changqing Li~a,Zhongsheng Yu~a,Peng Huang~b,Honggang Wu~a,Chuanxian Wei~a, Nannan Zhu~a,Yan Shen~b,Yixu Chen~a,Bo Zhang~b,Wu-Min Deng~(c,*),Renjie Jiao~(a,*) a State Key Laboratory of Brain and Cognitive Science,Institute of Biophysics,The Chinese Academy of Sciences,Datun Road 15,Beijing 100101,China b Key Laboratory of Cell Proliferation and Differentiation of Ministry of Education,College of Life Sciences,Peking University,Beijing 100871,China c Department of Biological Science,Florida State University,Tallahassee,Florida 32304-4295,USA. 遗传学报. 2012(05)
本文编号：2968687
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：135 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
载体构建流程图
图 1.2 位点特异性 TALEN 构建流程图Fig1.2 Construction of the TALEN vector1）根据设计的 TALEN 靶位点序列，将第 1-10 碱基对应的 RVD 模块和pFUS-A 依次加入 A 管中，第 11-（N-1）碱基个 RVD 模块和 pFUS-B（N-1）依次加入 B 管中，连接反应体系见表 1.5。表 1.5 连接反应体系Tab1.5 Ligation systemComponent AmountEach RVD module vector 1μL(150ng)pFUS-A/pFUS-B 1μL(150ng)10×T4 DNA ligase buffer 2μL
引物序列（5’- 3’）TTGGCGTCGGCAAACAGTGGGGCGACGAGGTGGTCGTTGG测 TALEN 活性体系构建le-strand annealing, SSA)是一种常用的色荧光蛋白 EGFP 作为报告基因。检测整的同源 EGFP 片段,2 个片段之间被终 TALEN 将靶位点双链 DNA 切割后，性获得完整的 EGFP 序列，使绿色荧此，通过比较使用 TALEN 前后绿色荧外活性进行检测。
【参考文献】：
期刊论文
[1]Rapid and Cost-Effective Gene Targeting in Rat Embryonic Stem Cells by TALENs[J]. Charles Ashton. 遗传学报. 2012(06)
[2]Efficient and Specific Modifications of the Drosophila Genome by Means of an Easy TALEN Strategy[J]. Jiyong Liu~a,Changqing Li~a,Zhongsheng Yu~a,Peng Huang~b,Honggang Wu~a,Chuanxian Wei~a, Nannan Zhu~a,Yan Shen~b,Yixu Chen~a,Bo Zhang~b,Wu-Min Deng~(c,*),Renjie Jiao~(a,*) a State Key Laboratory of Brain and Cognitive Science,Institute of Biophysics,The Chinese Academy of Sciences,Datun Road 15,Beijing 100101,China b Key Laboratory of Cell Proliferation and Differentiation of Ministry of Education,College of Life Sciences,Peking University,Beijing 100871,China c Department of Biological Science,Florida State University,Tallahassee,Florida 32304-4295,USA. 遗传学报. 2012(05)
本文编号：2968687
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