猪源BVDV-2感染性克隆的构建及非结构蛋白N pro 的相关功能探析

发布时间：2021-01-10 13:21

　　牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus, BVDV）的宿主谱非常广,除了感染牛以外,还可引起猪、羊、鹿、骆驼和多种野生动物发病。该病的临床症状具有多种形式,包括牛病毒性腹泻-黏膜病、繁殖障碍、血小板减少与出血综合征、持续性感染、免疫耐受等。母畜在怀孕后30-120天内感染非致细胞病变型（noncytopathic,NCP） BVDV,由于此时胎儿的免疫系统尚未发育完全,不能免疫识别外源的NCP型BVDV,因此可造成胎儿死亡、产死胎和畸形胎等,存活的胎儿虽表现正常,但持续性感染BVDV并终身带毒,成为重要传染源。事实上,持续性感染是BVDV在环境中维持长期存在的重要原因之一。近年来,由于猪和感染BVDV的牛群直接或间接接触、给猪饲喂牛奶或牛下水、或接种污染BVDV的猪瘟疫苗等要素,使得猪群中BVDV感染率急剧升高。值得注意的是,猪瘟疫苗制备过程中使用的牛血清和细胞系也一定程度上增加了猪感染BVDV的风险。由于BVDV和猪瘟病毒（classical swine fever virus, CSFV）在血清学上有一定的交叉反应,因而在猪瘟检疫过程中,常常将BV... 

【文章来源】：扬州大学江苏省

【文章页数】：110 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
目录
符号说明
文献综述
    一. 猪感染BVDV的研究进展
        1. 猪源BVDV的流行史
        2. 猪感染BVDV的临床症状
        3. 猪源BVDV的传染源
        4. 猪感染BVDV和CSFV的鉴别诊断
    二. BVDV感染性克隆的研究进展
        1. 感染性克隆研究的意义和策略
        2. BVDV感染性克隆的应用
    三. 非结构蛋白与细胞抗病毒天然免疫
        1. 细胞抗病毒天然免疫
        2. BVDV非结构蛋白的功能研究进展
    四. 开展本论文研究的背景及意义
    参考文献
第一章 猪源牛病毒性腹泻病毒的分离与鉴定
    摘要
    Abstract
    1. 材料
        1.1 样品来源及背景
        1.2 毒株、细胞和菌株
        1.3 主要试剂
        1.4 主要仪器
    2. 方法
        2.1 引物设计
        2.2 病毒的分离培养
        2.3 间接免疫荧光
        2.4 病毒RNA的提取和RT-PCR
        2.5 基因克隆及测序分析
    3. 结果
        3.1 RT-PCR检测
        3.2 间接免疫荧光检测结果
        3.3 基因分型
        3.4 E2基因的同源性分析
    4. 讨论
    参考文献
第二章 猪源BVDV-2分离株SH-28全基因组序列的测定与分析
    摘要
    Abstract
    1. 材料
        1.1 细胞、毒株和菌株
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
    2. 方法
        2.1 病毒增殖
        2.2 引物设计
        2.3 病毒基因组中间序列的测定
        2.4 病毒基因组末端序列的测定
        2.5 基因序列的拼接与分析
    3. 结果
        3.1 RT-PCR扩增、测序及拼接
        3.2 SH-28全基因组序列遗传信息分析
    4. 讨论
    参考文献
第三章 猪源BVDV-2分离株感染性克隆的构建及病毒拯救
    摘要
    Abstract
    1. 材料
        1.1 病毒、细胞、菌体和载体
        1.2 试剂与抗体
        1.3 主要仪器
    2. 方法
        2.1 SH-28株全长cDNA感染性克隆的构建
        2.2 亚基因感染性克隆的构建
        2.3 体外转录
        2.4 细胞转染
        2.5 感染性病毒粒子的鉴定
    3. 结果
        3.1 SH-28株全长cDNA感染性克隆的构建与鉴定
        3.2 亚基因组感染性克隆的构建与鉴定
        3.3 vASH病毒的拯救与鉴定
pro缺失病毒的拯救与鉴定">        3.4 vASH⊿N^pro缺失病毒的拯救与鉴定
        3.5 病毒滴度增长趋势的比较
    4. 讨论
    参考文献
第四章 猪源BVDV-2非结构蛋白的功能探析
    摘要
    Abstract
    1. 材料
        1.1 病毒、细胞、菌体和载体
        1.2 试剂与抗体
        1.3 主要仪器
    2. 方法
        2.1 引物设计
        2.2 重组真核表达质粒的构建与鉴定
        2.3 细胞转染
        2.4 Western blot检测非结构蛋白的表达
        2.5 荧光定量PCR检测
    3. 结果
        3.1 重组真核表达质粒的鉴定
        3.2 非结构蛋白表达的检测
        3.3 猪源BVDV-2及其非结构蛋白对IFN-I表达的影响
        3.4 过量表达非结构蛋白对猪源BVDV-2诱导抗病毒蛋白表达的影响
        3.5 缺失表达Npro蛋白对猪源BVDV-2诱导抗病毒蛋白表达的影响
    4. 讨论
    参考文献
全文小结
本论文的创新点
致谢
攻读学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]警惕猪群中牛病毒性腹泻病毒感染[J]. 李娇,祖立闯,王金良,苗立中,王艳,沈志强.  养猪. 2013(05)
[2]猪群常见疫病混合感染情况调查[J]. 梁晟,郑敏,郑列丰,杨荣,温丽霞,付薇.  中国畜牧兽医. 2013(06)
[3]福建龙岩规模化猪场BVDV感染的血清学调查[J]. 戴爱玲,魏春华,黄思琼,李晓华,杨小燕.  龙岩学院学报. 2013(02)
[4]抗病毒蛋白PKR的结构和功能[J]. 夏君,谢炯,张萍.  中国免疫学杂志. 2013(02)
[5]牛病毒性腹泻病毒感染牛外周血单核细胞对IFN-α、β、γmRNA转录的影响[J]. 韩猛立,黄新,钟发刚.  中国兽医学报. 2012(08)
[6]牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白NS3的研究进展[J]. 侯佩莉,孙涛,何洪彬.  中国畜牧兽医. 2012(05)
[7]猪源牛病毒性腹泻病毒套式PCR检测方法的建立[J]. 邓宇,蔺涛,张荣,丛雁方,张建武,袁世山,文心田,郑浩.  中国兽医学报. 2012(05)
[8]猪源牛病毒性腹泻病毒SD0803株E2蛋白的表达及抗体制备[J]. 邓宇,蔺涛,孙春清,张宏彪,张荣,龙进学,黄律,文心田,曹三杰,童光志,袁世山,郑浩.  动物医学进展. 2012(04)
[9]牛病毒性腹泻病毒反向遗传学研究进展[J]. 何延华,韩猛立,黄新,钟发刚,薄新文.  中国畜牧兽医. 2012(03)
[10]猪瘟和蓝耳病疫苗中BVDV和PCV污染情况调查[J]. 叶兆美.  四川畜牧兽医. 2012(03)

硕士论文
[1]ISG15的原核表达和多克隆抗体的制备及其与猪瘟病毒相互作用的初步研究[D]. 蔡新斌.广西大学 2011
[2]BVDV-2分离株XJ-04全基因组测序和抗BVDV单克隆抗体制备及初步应用[D]. 林燕清.扬州大学 2010
[3]BVDV基因1型和2型RT-PCR鉴别诊断方法的建立和抗BVDV单克隆抗体的制备[D]. 蒋颖.扬州大学 2007



本文编号：2968780