5种分子伴侣对水貂阿留申病毒核衣壳蛋白VP2部分基因可溶性表达的影响

发布时间：2021-01-11 07:13

　　为实现水貂阿留申病毒（Aleutian disease virus,ADV）部分VP2基因的可溶性表达,进一步探究目的蛋白的反应原性,本研究利用基因工程技术克隆ADV衣壳蛋白VP2部分基因,并亚克隆至原核表达载体pET30a（+）中,获得重组表达载体pET-30a-M,经诱导表达后,SDS-PAGE确定蛋白表达形式,尝试降低诱导温度及诱导剂浓度来增加可溶性蛋白表达量,但效果不显著;随后,为增加可溶性表达,尝试将pET-30a-M分别与pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pG-Tf2和pTf16 5种伴侣蛋白共表达。通过SDS-PAGE筛选有效的伴侣蛋白,将伴侣蛋白pG-KJE8、pGro7、pKJE7、pG-Tf2和pTf16 5种质粒分别转入感受态细胞BL21（DE3）,将pET-30a-M质粒分别转入含各种伴侣蛋白的感受态细胞。各种共表达菌株经双抗性筛选,诱导剂诱导表达,SDS-PAGE分析蛋白的表达情况。并从诱导温度和伴侣蛋白诱导剂L-Arabinose剂量两个方面筛选最佳表达条件。SDS-PAGE和Western blot分析结果表明重组表达载体pET-30a-M诱导表达后... 

【文章来源】：中国兽医学报. 2020,40(09)北大核心

【文章页数】：8 页

【部分图文】：

VP2部分基因片段的PCR扩增鉴定结果

重组质粒的双酶切鉴定结果

在37℃、IPTG 1.0 mmol/L、诱导4 h的条件下,分析蛋白表达情况,SDS-PAGE结果显示,与空载体全菌及诱导前的全菌相比,诱导后的全菌在约70 000处有明显条带,与预期的蛋白大小一致(图3),蛋白主要以包涵体形式存在;在相同诱导时间(4 h)和IPTG诱导剂浓度(1.0 mmol/L)的条件下,分别以不同温度16,25,30和37℃进行诱导表达,诱导4 h后,取出菌液,超声破碎后,将超声后的上清通过SDS-PAGE分析,结果显示,温度改变并不能有效增加可溶性蛋白表达(图4)。在相同诱导时间(4 h)和诱导温度(37℃)条件下,分别以0.1,0.2,0.4,0.6,0.8和1.0 mmol/L的IPTG进行诱导表达,利用SDS-PAGE分析诱导表达后超声破碎的上清,结果显示IPTG浓度的改变并不能有效增加可溶性蛋白的表达(图5)。图4 不同诱导温度对蛋白表达的影响


本文编号：2970332