基于Imp肽核酸探针检测血清1型鸭疫里默氏菌及基于gyrA肽核酸诺氟沙星增效作用的研究

发布时间：2021-01-17 15:06

　　鸭疫里默氏菌（Riemerella anatipestifer,RA）是一种革兰氏阴性菌,主要引起鸭、鹅、火鸡等禽类的接触性传染病。本文开展了基于膜通透性增强蛋白（Imp）的肽核酸（PNA）探针检测血清1型RA及基于拓扑异构酶A（gyrA）的肽核酸增强诺氟沙星抗菌作用的研究,主要内容和结果如下:1.基于Imp肽核酸探针检测血清1型RA的研究和应用利用软件筛选出imp基因的第134-145位点序列合成PNA-imp。在RA imp引物上添加5-FAM荧光标记,然后以血清1型RA CH-1株、血清2型RA CH-2株、ATCC 11845株及未知血清型RA各临床分离株为模板进行PCR扩增,将PNA-imp与扩增产物进行杂交,荧光显微镜下PNA-imp与靶位点特异性结合后会呈现绿色荧光亮斑。结果表明:在PNA-imp 6.2μM、60°C条件下可以特异检测到血清1型RA;对2和6型RA、大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌、多杀性巴氏杆菌等检测结果均为阴性。2.基于gyrA肽核酸增强抗菌作用的研究和应用利用软件筛选出gyrA基因的第1591-1604位点序列合成PNA-gyrA。对比PNA-gyrA与喹... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

γPNA与DNA杂交复合体结构

γPNA调控翻译[78]

RNAstructure 5.8软件绘制 imp mRNA 的二潜在的反义作用靶区域，如发卡、膨胀环、内件分析靶区域 RNA 与 PNA 结合的各项参数：净能量（overall△G）、PNA 与直链靶序列结合因双链解开所需要的能量（Break-targΔG）、Po-self△G）、PNA 分子间结合所需要的能量（o温度（Tm），然后根据最低自由能原则筛选出结成 PNA-imp 序列递交至 panagene 公司进行合成，得到 PNA-imp 结构示意图。如图 3 所示，其中CTCTTGCGA。

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：2983099