5’非编码区自然插入19nt对J亚群禽白血病病毒复制和致病力的影响
发布时间：2021-01-19 18:33
J亚群禽白血病是由J亚群禽白血病病毒（Avian Leukosis Virus, ALV-J）引起的一类禽肿瘤性疾病。ALV-J于1988年首次从肉用型鸡中分离鉴定出,主要引起肉鸡的骨髓细胞瘤（Myelocytoma）和多种细胞类型的恶性肿瘤。我国自1999年从肉用型鸡中首次分离出ALV-J以来,ALV-J在我国呈蔓延的趋势。2004年开始我国商品蛋鸡感染ALV-J的报告不断增加,并且ALV-J的感染能够引起商品蛋鸡产生多种类型的肿瘤。ALV-J致病性的增强导致ALV-J在我国蛋鸡群中的高发病率和高死亡率,使我国蛋鸡业生产遭受了巨大的冲击。有研究显示,我国部分ALV-J蛋鸡流行毒株同ALV-J原型毒株相比其基因组发生规律性变异,且某些变异与ALV-J致病力增强相关。因此从ALV-J基因组进化的角度阐明ALV-J的分子致病机制变得刻不容缓。结合近年来本实验室对我国部分地区ALV-J蛋鸡毒株进行的分子流行病学调查结果和国内外多篇已发表的文献,显示我国40%的ALV-J蛋鸡分离株基因组5’端非编码区（5’untranslated region,5’UTR）的前导区序列中出现一个连续19nt的...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ALV-J原型参考株HPRS-103前病毒基因组结构简图
图2.1 rSD1009和rSD1009Al9感染性克隆的构建最上面为rSD1009前病毒基因组,其包括LTR,gag/poUnv(gp85andgp37)，部分rTM，部分DR-丨和E元件。（A)构建rSD1009前病毒DNA的过程，将由PCR扩增得到的3个片段按照I，n和11丨的顺序，依次连接到pBlueScript 11 KS (+)载体中，黑色箭头代表引物的位置》(B)前导序列19nt的插入构建成rSD1009Al9前病毒DNA。Figure 2.1 Schematic diagrams showing the construction of the rSD1009 and rSD1009A19 proviral DNA
以SD1009前病毒cDNA为模板进行PCR扩增，分别得到片段I 3620 bp,片段113068 bp,片段mi216bp，与预期大小相符（图2.2)。I 2 J 2 1 23000.P —一 3叫 EE-3000.P BE 丨2丨_■ ■ _■ ■ ■ABC图2.2片段I、n和m PCR彳广增结果(A) 1： MIOOOO： 2：片段 I (B) 1：片段II; 2： MIOOOO (C)丨：M2000： 2：片段IIIFig 2,2 The PCR results of fragment 1，II and III(A) 1: MIOOOO； 2: fragment I (B) 1: fragmentII ； 2： MIOOOO (C) 1: M2000； 2: fragmentlll2.6.1.2 pBlu-SD1009重组质粒的鉴定构建好的SD1009分离株前病毒cDNA重组质粒pBlu-SD1009，Eagl在pBlu-SD〗009中为单一酶切位点，以Eagl进行酶切鉴定，获得大小为10733bp的片段，与预期大小相符（图2.3)。1 2■3bp IL-J Im11
【参考文献】：
期刊论文
[1]蛋鸡J亚群禽白血病病毒SD1009分离株的分离鉴定及全基因组序列分析[J]. 王琦,王永强,康忠惠,高玉龙,潘伟,李久宽,秦立廷,祁小乐,高宏雷,王笑梅. 中国预防兽医学报. 2011(08)
[2]Real-time RT-PCR检测J亚群禽白血病病毒的研究[J]. 张在平,田进,孟庆文,马学恩. 黑龙江畜牧兽医. 2010(05)
[3]2009年我国部分地区禽白血病分子流行病学调查[J]. 高玉龙,邵华斌,罗青平,潘伟,秦立廷,孙芬芬,刘超男,高宏雷,祁小乐,王笑梅. 中国预防兽医学报. 2010(01)
[4]J亚群与E亚群禽白血病自然重组病毒的全基因组序列分析[J]. 刘超男,高玉龙,高宏雷,祁小乐,景龙,潘伟,王笑梅. 中国预防兽医学报. 2009(12)
[5]J亚群禽白血病病毒SCAU-0901株的分离鉴定[J]. 张小桃,卢受昇,张贺楠,陈平洁,赖汉漳,廖明,曹伟胜. 中国兽医科学. 2009(08)
[6]病猪肺组织中PRRSV抗原免疫组织化学Envision法的原位检测[J]. 杨鸿,钱君娣,何启盖,马春全,卢玉葵,邓桦,曾振灵. 中国兽医科学. 2009(03)
[7]中国麻鸡中发现禽J亚群白血病[J]. 成子强,张利,刘思当,张玲娟,崔治中. 微生物学报. 2005(04)
[8]蛋鸡J亚群禽白血病的分子生物学诊断[J]. 徐镔蕊,董卫星,余春明,Lucy F.Lee. 病毒学报. 2005(04)
[9]J亚群白血病病毒NX0101株感染性克隆化病毒的构建及其致病性[J]. 张纪元,崔治中,丁家波,姜世金. 微生物学报. 2005(03)
[10]抗J亚群禽白血病病毒囊膜糖蛋白特异性单克隆抗体的研制及其特性[J]. 秦爱建,崔治中,LEELUCY,FADLYALY. 畜牧兽医学报. 2001(06)
本文编号：2987505
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：46 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
ALV-J原型参考株HPRS-103前病毒基因组结构简图
图2.1 rSD1009和rSD1009Al9感染性克隆的构建最上面为rSD1009前病毒基因组,其包括LTR,gag/poUnv(gp85andgp37)，部分rTM，部分DR-丨和E元件。（A)构建rSD1009前病毒DNA的过程，将由PCR扩增得到的3个片段按照I，n和11丨的顺序，依次连接到pBlueScript 11 KS (+)载体中，黑色箭头代表引物的位置》(B)前导序列19nt的插入构建成rSD1009Al9前病毒DNA。Figure 2.1 Schematic diagrams showing the construction of the rSD1009 and rSD1009A19 proviral DNA
以SD1009前病毒cDNA为模板进行PCR扩增，分别得到片段I 3620 bp,片段113068 bp,片段mi216bp，与预期大小相符（图2.2)。I 2 J 2 1 23000.P —一 3叫 EE-3000.P BE 丨2丨_■ ■ _■ ■ ■ABC图2.2片段I、n和m PCR彳广增结果(A) 1： MIOOOO： 2：片段 I (B) 1：片段II; 2： MIOOOO (C)丨：M2000： 2：片段IIIFig 2,2 The PCR results of fragment 1，II and III(A) 1: MIOOOO； 2: fragment I (B) 1: fragmentII ； 2： MIOOOO (C) 1: M2000； 2: fragmentlll2.6.1.2 pBlu-SD1009重组质粒的鉴定构建好的SD1009分离株前病毒cDNA重组质粒pBlu-SD1009，Eagl在pBlu-SD〗009中为单一酶切位点，以Eagl进行酶切鉴定，获得大小为10733bp的片段，与预期大小相符（图2.3)。1 2■3bp IL-J Im11
【参考文献】：
期刊论文
[1]蛋鸡J亚群禽白血病病毒SD1009分离株的分离鉴定及全基因组序列分析[J]. 王琦,王永强,康忠惠,高玉龙,潘伟,李久宽,秦立廷,祁小乐,高宏雷,王笑梅. 中国预防兽医学报. 2011(08)
[2]Real-time RT-PCR检测J亚群禽白血病病毒的研究[J]. 张在平,田进,孟庆文,马学恩. 黑龙江畜牧兽医. 2010(05)
[3]2009年我国部分地区禽白血病分子流行病学调查[J]. 高玉龙,邵华斌,罗青平,潘伟,秦立廷,孙芬芬,刘超男,高宏雷,祁小乐,王笑梅. 中国预防兽医学报. 2010(01)
[4]J亚群与E亚群禽白血病自然重组病毒的全基因组序列分析[J]. 刘超男,高玉龙,高宏雷,祁小乐,景龙,潘伟,王笑梅. 中国预防兽医学报. 2009(12)
[5]J亚群禽白血病病毒SCAU-0901株的分离鉴定[J]. 张小桃,卢受昇,张贺楠,陈平洁,赖汉漳,廖明,曹伟胜. 中国兽医科学. 2009(08)
[6]病猪肺组织中PRRSV抗原免疫组织化学Envision法的原位检测[J]. 杨鸿,钱君娣,何启盖,马春全,卢玉葵,邓桦,曾振灵. 中国兽医科学. 2009(03)
[7]中国麻鸡中发现禽J亚群白血病[J]. 成子强,张利,刘思当,张玲娟,崔治中. 微生物学报. 2005(04)
[8]蛋鸡J亚群禽白血病的分子生物学诊断[J]. 徐镔蕊,董卫星,余春明,Lucy F.Lee. 病毒学报. 2005(04)
[9]J亚群白血病病毒NX0101株感染性克隆化病毒的构建及其致病性[J]. 张纪元,崔治中,丁家波,姜世金. 微生物学报. 2005(03)
[10]抗J亚群禽白血病病毒囊膜糖蛋白特异性单克隆抗体的研制及其特性[J]. 秦爱建,崔治中,LEELUCY,FADLYALY. 畜牧兽医学报. 2001(06)
本文编号：2987505
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