家猪Ⅲ型干扰素基因家族性质及干扰素λ,δ,ω家族的抗病毒功能研究

发布时间：2021-02-01 05:24

　　通过BLAST方法,我们从GenBank中获得了家猪面型干扰素PoIFN-?J,-入3的标准序列,并设计特异性引物,从猪肾细胞PK-15中调取了家猪千扰素PoIFN-、l,43的cDNA序列。使用软件进行序列分析,并通过构建不同物种的IFN-?^系统发生树,揭示了各亚型么间的进化关系。为了进一步分析PoIFN-人家族的性质,构建了pcDNA3.1/myc-战s（-）B/PoIFN-、s真核表达载体,并进行表达及性质研究。首先检测了在BHK-21细胞中转录及翻译水平的表达情况,发现R)IFN-化分别具有1个及2个N端-糖基化位点。其次,鉴定了PoIFN-Xs在猪肾细胞旧RS-2及PK-15细胞中对poly I:C、FMDV、PRV的应答表达谱。此外,检测了PoIFN-Xs在扭艮S-2中诱导抗病毒基因及细胞因子的表达情况,结果显示PoIFN-?^可显著诱导MX、OAS、PKR等ISGs及细胞因子正-6、TNF-a的表达。再者,抗病毒实验表明,PoIFN-?^s在PK-15/PRV及IBRS-2/FMDV系统均具有低于P〇IFN-al2的抗病毒活性。本研究测定了化IFN-、-0),-S家族在... 

【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１：?ＩＦＮ表达模式及启动子示意图（ＫＯＴＥＮＫＯ?ＳＶ．，２０１１）??４??

ＩＦＮ－ＸＲ１表达，大约是角质形成细胞的３倍；在Ｔ细胞，高表达量和低表达量均有??检出，单核细胞也表现出很低的受体水平??所有的ＩＩ型细胞因子均能通过ＳＴＡＴｓ和ＪＡＫ途径进行信号转导（图２）?Ｐ０１。配??体－受体复合物招募完成后，Ｊａｋｌ和Ｔｙｋ２介导受体链磯酸化，在含磯酸化酪氨酸??激酶基序的ＩＦＮ－化１胞内区形成ＳＴＡＴ１和ＳＴＡＴ２的作用位点。Ｉ型或ｍ型干扰素??介导的信号传递导致转录因子复合物投Ｇ巧的形成；ＩＳＧＦ３聚合后将转移到核内，??并与ＩＳＧｓ启动子区域的ＩＳＲＥ相结合，从而诱导抗病毒活性，并在某些细胞上调??ＭＨＣ?Ｉ抗原的表达ＰＷ。除ＳＴＡＴ－ＪＡＫ途径外，Ｉ型和曲型干扰素还可诱导其他信??５??

糖基化情况。真核表达的ＰｏＩＦＮ－Ｕ糖基化蛋白大小约为３０旺），未糖基化条带约??为２５ｋＤ；?ＰｏＩＦＮ－？３完全糖基化蛋白大小约为３５ｋＤ，未糖基化条带约为２０旺），??此外存在一条约３０吐）的不完全糖基化条带（图６）。运表明ＰｏＩＦＮ－Ｍ，－＞ｕ３分别??存在１个与２个糖基化位点，与软件预测结果一致。???ｋＤａ?Ｍａｒｋｅｒ?Ｃｏｎｔｒｏｌ?ＰｏｌＦＮ－?Ｘ?３?Ｐ〇ＩＦＮ－?Ｘ?１??３５－?’巧?‘?＇Ｐｉｊ＊??２５－?一??巧一顯．．??图６．?ＩＦＮ上清Ｗｅｓ化ｒｎ－ｂｌｏｔ结果??蛋白分子量标记／实验蛋白条带分别在白光／化学发光模式拍摄。＋／－分别表示使用或未使用??Ｎ－糖基化抑制剂Ｔｕｎｉｃａｍｙｃｉｎ处理，＊示糖基化蛋白条带，＃示未糖基化蛋白条带。??１．４．４?ＦｏＩＦＮ－Ｘｓ各亚型病毒诱导表达谱??病毒感染细胞后，通常会诱导干扰素的表达。为了解猪细胞对病毒诱导的曲??型ＩＦＮ应答，我们检测了?ＦＭＤＶ、ＰＲＶ?Ｗ及ｐｏｌｙ?Ｉ：Ｃ处理细胞后，：ＰｏＩＦＮ－Ｍ，－入３??的ｍＲＮＡ水平。在阴性对照中，：ＰｏＩＦＮ－ａｌ２与化ＩＦＮ－Ｍ的表达量显著高于??ＰｏＩＦＮ－？３的本底水平（未显示）。在旧ＲＳ－２轴胞中，ｐｏｌｙ?Ｉ：Ｃ对ＰｏＩＦＮ－化－Ｘ３??有显著诱导作用，且化高于２４１１，其中ＰｏＩＦＮ－、３表达量的升高最为明显（图７Ａ）；??ＦＭＤＶ可显著诱导化ＩＦＮ－Ｍ表达


本文编号：3012248