uS10和TRAF6在猪瘟病毒感染过程中的作用及机制
发布时间：2021-02-07 20:12
猪瘟（Classical swine fever,CSF）是由猪瘟病毒（Classical swine fever virus,CSFV）引起的家猪和野猪的一种传染病,对养猪业造成的危害巨大,被世界动物卫生组织（OIE）列为必须报告的动物传病,我国将其列为一类动物疫病。CSFV在感染过程中抑制宿主细胞的免疫应答,从而利于自身的持续性复制。深入研究宿主细胞与CSFV的相互作用及其在CSFV复制中的作用机制,探索CSFV的免疫逃逸机理,从而为有效控制CSFV复制提供新的策略。本文主要围绕与CSFV Npro相互作用的核糖体蛋白（ribosomal protein S20,uS10）和与CSFV NS3相互作用的肿瘤坏死因子受体相关因子6（tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6）对CSFV复制的影响及其作用机制展开了研究,获得了以下结果:（1）与CSFV Npro和NS3蛋白互作的胞内蛋白的筛选。通过酵母双杂交方法在猪肺泡巨噬细胞（PAM）cDNA文库中,分别筛选了与CSFV...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：110 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
TRAF家族蛋白结构域（引自TizianaZottietal.2017）
包括RelA、RelB、c-Rel、NFκB1（p105/p50）和NFκB2（p100/p52）。有两条不同的途径，一条经典途径由细胞因子TNF-α、IL-1和细菌成分激活胞因子表达和抑制凋亡过程中发挥重要作用。当配体刺激时，受体招募接头MyD88、TRIF及通过连续的招募触发信号级联的IRAK家族成员IRAK4及IRF6。TRAF6 RING结构域的泛素连接酶合成赖氨酸63（K63）连接的聚泛素链素化TRAF6、TRAF2和NEMO，泛素化的TRAF6激活蛋白激酶TAK1，再依次激IKK）复合物，包括IKKα、IKKβ和NEMO，然后IKK在特定的丝氨酸残基α，使其发生泛素化及蛋白酶介导的降解，最终导致NF-κB的释放及快速核各种目标基因的转录（图2-2）(Tang et al. 2018)。另有研究报道，在NF-κB激，TRAF6发生了蛋白酶复合体介导的降解，提示TRAF6可能通过自身的泛素的降解来调节NF-κB通路的激活。另一个非经典途径，由CD40、RANK、诱胞生长因子14（Fn14）或B细胞激活因子（BAFF）刺激激活，是淋巴器官形，这个途径包括激活IKKα同源二聚体，然后磷酸化p100的C端结构域，并生成2/RelB复合物进入细胞核并激活靶基因。
pro; B. Autoactivation detection of NS3图3-2 诱饵蛋白Npro和NS3的自激活检测Fig.3-2 Autoactivation detection of Nproand NS3 protein3.3.2.2 诱饵蛋白的毒性检测取 pGBKT7-Npro和 pGBKT7-NS3 及空载体 pGBKT7 的重组菌液在 SD/-Trp 液体培养基中培养，绘制重组菌液的生长曲线，结果显示（图3-3），pGBKT7-Npro和pGBKT7-NS3重组 Y2HGold 菌与及空载体 pGBKT7 的重组菌的生长曲线一致，说明诱饵蛋白 Npro和NS3 对酵母菌的生长基本没有影响，即 Npro和 NS3 对酵母细胞没有毒性。图3-3 诱饵蛋白Npro和NS3对酵母细胞的毒性检测Fig.3-3 Toxicity detection of Nproand NS3 protein on yeast3.3.3 酵母双杂交阳性克隆的筛选将各Y2HGold酵母重组菌分别与Y187重组菌进行杂交，交配前，含有文库质粒的Y187重组菌的滴度为1.2×107cfu/mL，含有诱饵质粒pGBKT7-Npro和pGBKT7-NS3的Y2HGold酵母菌与Y187重组菌杂交后的滴度分别是3.9×105cfu/mL和4.5×105cfu/mL。诱
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪瘟活疫苗(传代细胞源)对我国不同猪瘟病毒流行毒株的免疫保护研究[J]. 王琴,范学政,徐璐,赵启祖,张乾义,邹兴启,朱元源,杨劲松,宁宜宝. 中国兽医杂志. 2016(12)
[2]2015年我国部分地区2.1d新基因亚型猪瘟病毒的分子流行病学分析[J]. 冯丽苹,张洪亮,刘春晓,冷超粮,陈家锃,李真,彭金美,王倩,白云,张武超,安同庆,蔡雪辉,童光志,田志军. 中国预防兽医学报. 2015(09)
[3]我国猪瘟病毒基因流行变异研究[J]. 郝飞,汤德元,曾智勇,李春燕,罗险峰,甘振磊,刘建,王洪光. 中国猪业. 2013(02)
[4]猪瘟病毒单克隆抗体的研究进展[J]. 王万利,常天明,李娜,仇华吉. 中国兽医科学. 2010(06)
硕士论文
[1]水泡性口炎病毒G蛋白受体的筛选及初步鉴定[D]. 孙秀萍.吉林大学 2013
本文编号：3022764
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：110 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
TRAF家族蛋白结构域（引自TizianaZottietal.2017）
包括RelA、RelB、c-Rel、NFκB1（p105/p50）和NFκB2（p100/p52）。有两条不同的途径，一条经典途径由细胞因子TNF-α、IL-1和细菌成分激活胞因子表达和抑制凋亡过程中发挥重要作用。当配体刺激时，受体招募接头MyD88、TRIF及通过连续的招募触发信号级联的IRAK家族成员IRAK4及IRF6。TRAF6 RING结构域的泛素连接酶合成赖氨酸63（K63）连接的聚泛素链素化TRAF6、TRAF2和NEMO，泛素化的TRAF6激活蛋白激酶TAK1，再依次激IKK）复合物，包括IKKα、IKKβ和NEMO，然后IKK在特定的丝氨酸残基α，使其发生泛素化及蛋白酶介导的降解，最终导致NF-κB的释放及快速核各种目标基因的转录（图2-2）(Tang et al. 2018)。另有研究报道，在NF-κB激，TRAF6发生了蛋白酶复合体介导的降解，提示TRAF6可能通过自身的泛素的降解来调节NF-κB通路的激活。另一个非经典途径，由CD40、RANK、诱胞生长因子14（Fn14）或B细胞激活因子（BAFF）刺激激活，是淋巴器官形，这个途径包括激活IKKα同源二聚体，然后磷酸化p100的C端结构域，并生成2/RelB复合物进入细胞核并激活靶基因。
pro; B. Autoactivation detection of NS3图3-2 诱饵蛋白Npro和NS3的自激活检测Fig.3-2 Autoactivation detection of Nproand NS3 protein3.3.2.2 诱饵蛋白的毒性检测取 pGBKT7-Npro和 pGBKT7-NS3 及空载体 pGBKT7 的重组菌液在 SD/-Trp 液体培养基中培养，绘制重组菌液的生长曲线，结果显示（图3-3），pGBKT7-Npro和pGBKT7-NS3重组 Y2HGold 菌与及空载体 pGBKT7 的重组菌的生长曲线一致，说明诱饵蛋白 Npro和NS3 对酵母菌的生长基本没有影响，即 Npro和 NS3 对酵母细胞没有毒性。图3-3 诱饵蛋白Npro和NS3对酵母细胞的毒性检测Fig.3-3 Toxicity detection of Nproand NS3 protein on yeast3.3.3 酵母双杂交阳性克隆的筛选将各Y2HGold酵母重组菌分别与Y187重组菌进行杂交，交配前，含有文库质粒的Y187重组菌的滴度为1.2×107cfu/mL，含有诱饵质粒pGBKT7-Npro和pGBKT7-NS3的Y2HGold酵母菌与Y187重组菌杂交后的滴度分别是3.9×105cfu/mL和4.5×105cfu/mL。诱
【参考文献】：
期刊论文
[1]猪瘟活疫苗(传代细胞源)对我国不同猪瘟病毒流行毒株的免疫保护研究[J]. 王琴,范学政,徐璐,赵启祖,张乾义,邹兴启,朱元源,杨劲松,宁宜宝. 中国兽医杂志. 2016(12)
[2]2015年我国部分地区2.1d新基因亚型猪瘟病毒的分子流行病学分析[J]. 冯丽苹,张洪亮,刘春晓,冷超粮,陈家锃,李真,彭金美,王倩,白云,张武超,安同庆,蔡雪辉,童光志,田志军. 中国预防兽医学报. 2015(09)
[3]我国猪瘟病毒基因流行变异研究[J]. 郝飞,汤德元,曾智勇,李春燕,罗险峰,甘振磊,刘建,王洪光. 中国猪业. 2013(02)
[4]猪瘟病毒单克隆抗体的研究进展[J]. 王万利,常天明,李娜,仇华吉. 中国兽医科学. 2010(06)
硕士论文
[1]水泡性口炎病毒G蛋白受体的筛选及初步鉴定[D]. 孙秀萍.吉林大学 2013
本文编号：3022764
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