副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素和假定丝氨酸蛋白酶EspPs的致病作用研究
发布时间：2021-02-21 23:45
副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis, HPS）是猪上呼吸道常在条件致病菌,在宿主免疫力低下时引发格拉瑟氏病,主要剖检病变是：多发性浆液性纤维素性胸膜炎、腹膜炎、心包炎、关节炎和脑膜炎。近年来该病的发生导致全球范围养猪业的巨大经济损失。为了有针对性地制定出高效的综合防治策略必须对该菌的分子致病机理进行剖析阐释。本研究以HPS细胞膨胀致死毒素（Cytolethal distending toxin, CDT）和假定的丝氨酸蛋白酶EspPs（包括EspP1和EspP2）为研究对象。它们都是HPS中已有报道的潜在的致病因子。以往对细胞膨胀致死毒素的研究多采用体外分析的方法,而体内研究的报道较少,而且在HPS中也没有CDT导致细胞凋亡的报道。IgA蛋白酶在逃避宿主天然免疫中发挥着重要作用,曾在流感嗜血杆菌等细菌中有报道,最近发现某些HPS菌株的分泌蛋白有IgA蛋白酶活性,但是还没有在HPS中发现和流感嗜血杆菌的IgA蛋白酶同源的基因,蛋白结构分析和基因序列分析发现HPS菌株SH0165中的假定的丝氨酸蛋白酶EspPs有可能是IgA蛋白酶。本研究主要取得的研究结果如卜：1.构建...
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第1章 文献综述
1.1 副猪嗜血杆菌概述
1.1.1 HPS培养及生化特性
1.1.2 HPS的血清学分型和基因分型
1.1.3 HPS的功能基因
1.1.4 格拉瑟氏病的防控
1.2 细胞致死膨胀毒素（CDT）致病作用的研究进展
1.2.1 CDT对细胞的致病作用
1.2.2 CDT在细菌性传染病中的致病作用
1.3 自然转化研究进展
1.3.1 自然转化的研究历史
1.3.2 自然转化的机制
1.3.3 自然转化用于基因缺失突变株构建
1.4 IgA蛋白酶研究进展
1.4.1 IgA蛋白酶的结构特征
1.4.2 IgA蛋白酶的生物学功能
第2章 HPS细胞致死膨胀毒素的致病作用研究
2.1 前言
2.2 试验材料
2.2.1 细菌、质粒与细胞
2.2.2 主要的酶与试剂盒
2.2.3 主要细菌、细胞培养基及配制
2.2.4 主要的细胞试验相关溶剂及配制
2.2.5 Western blot相关试剂及配制
2.2.6 Southern blot相关试剂及配制
2.2.7 主要的实验室器材
2.2.8 引物
2.2.9 实验动物
2.3 试验方法
R,oriT,sacB）的扩增,测序与保存"> 2.3.1 pK18mobsacB（KmR,oriT,sacB）的扩增,测序与保存
1G的构建"> 2.3.2 pK18-C1G的构建
2K的构建"> 2.3.3 pK18-C2K的构建
2.3.4 HPS模型菌株的筛选
2.3.5 自然转化法筛选基因缺失突变株及突变株检测
2.3.6 缺失菌株和野生菌株生长曲线的测定
2.3.7 野生菌株和缺失菌株分泌蛋白和全菌蛋白的提取
2.3.8 CDT分泌蛋白和菌体蛋白对PK15细胞形态的影响
2.3.9 HPS CDT与细胞凋亡的关系
2.3.10 HPS CDT对豚鼠的致病作用
2.4 结果与分析
1G的构建"> 2.4.1 质粒pK18-C1G的构建
2K的构建"> 2.4.2 质粒pK18-C2K的构建
2.4.3 自然转化法筛选cdt基因缺失突变株及突变株鉴定
2.4.4 缺失菌株和野生菌株生长曲线的测定
2.4.5 CDT对PK15形态的影响
2.4.6 CDT对细胞凋亡的作用
2.4.7 HPS CDT对豚鼠的致病作用
2.5 讨论
2.5.1 自然转化法构建cdt缺失突变株
2.5.2 HPS CDT对细胞的致病作用
2.5.3 HPS CDT对豚鼠的致病作用
第3章 丝氨酸蛋白酶EspPs的IgA蛋白酶活性研究
3.1 前言
3.2 试验材料
3.2.1 主要的菌株和质粒
3.2.2 用于蛋白表达纯化的主要试剂
3.2.3 用于IgA切割试验的蛋白和试剂
3.2.4 Western blot相关试剂
3.3 试验方法
3.3.1 重组蛋白EspP2pd的原核表达和纯化
3.3.2 HPS分泌蛋白的提取
3.3.3 IgA切割试验
3.4 结果与分析
3.4.1 重组蛋白EspP2pd在E.coli BL21（DE3）中的表达和纯化
3.4.2 IgA切割试验
3.4.3 IgA切割试验最佳切割时间的确定
3.4.4 IgA切割试验与蛋白的剂量依赖性
3.5 讨论
结论
参考文献
附录
附图
致谢
本文编号：3045098
【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：75 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略词表
第1章 文献综述
1.1 副猪嗜血杆菌概述
1.1.1 HPS培养及生化特性
1.1.2 HPS的血清学分型和基因分型
1.1.3 HPS的功能基因
1.1.4 格拉瑟氏病的防控
1.2 细胞致死膨胀毒素（CDT）致病作用的研究进展
1.2.1 CDT对细胞的致病作用
1.2.2 CDT在细菌性传染病中的致病作用
1.3 自然转化研究进展
1.3.1 自然转化的研究历史
1.3.2 自然转化的机制
1.3.3 自然转化用于基因缺失突变株构建
1.4 IgA蛋白酶研究进展
1.4.1 IgA蛋白酶的结构特征
1.4.2 IgA蛋白酶的生物学功能
第2章 HPS细胞致死膨胀毒素的致病作用研究
2.1 前言
2.2 试验材料
2.2.1 细菌、质粒与细胞
2.2.2 主要的酶与试剂盒
2.2.3 主要细菌、细胞培养基及配制
2.2.4 主要的细胞试验相关溶剂及配制
2.2.5 Western blot相关试剂及配制
2.2.6 Southern blot相关试剂及配制
2.2.7 主要的实验室器材
2.2.8 引物
2.2.9 实验动物
2.3 试验方法
R,oriT,sacB）的扩增,测序与保存"> 2.3.1 pK18mobsacB（KmR,oriT,sacB）的扩增,测序与保存
1G的构建"> 2.3.2 pK18-C1G的构建
2K的构建"> 2.3.3 pK18-C2K的构建
2.3.4 HPS模型菌株的筛选
2.3.5 自然转化法筛选基因缺失突变株及突变株检测
2.3.6 缺失菌株和野生菌株生长曲线的测定
2.3.7 野生菌株和缺失菌株分泌蛋白和全菌蛋白的提取
2.3.8 CDT分泌蛋白和菌体蛋白对PK15细胞形态的影响
2.3.9 HPS CDT与细胞凋亡的关系
2.3.10 HPS CDT对豚鼠的致病作用
2.4 结果与分析
1G的构建"> 2.4.1 质粒pK18-C1G的构建
2K的构建"> 2.4.2 质粒pK18-C2K的构建
2.4.3 自然转化法筛选cdt基因缺失突变株及突变株鉴定
2.4.4 缺失菌株和野生菌株生长曲线的测定
2.4.5 CDT对PK15形态的影响
2.4.6 CDT对细胞凋亡的作用
2.4.7 HPS CDT对豚鼠的致病作用
2.5 讨论
2.5.1 自然转化法构建cdt缺失突变株
2.5.2 HPS CDT对细胞的致病作用
2.5.3 HPS CDT对豚鼠的致病作用
第3章 丝氨酸蛋白酶EspPs的IgA蛋白酶活性研究
3.1 前言
3.2 试验材料
3.2.1 主要的菌株和质粒
3.2.2 用于蛋白表达纯化的主要试剂
3.2.3 用于IgA切割试验的蛋白和试剂
3.2.4 Western blot相关试剂
3.3 试验方法
3.3.1 重组蛋白EspP2pd的原核表达和纯化
3.3.2 HPS分泌蛋白的提取
3.3.3 IgA切割试验
3.4 结果与分析
3.4.1 重组蛋白EspP2pd在E.coli BL21（DE3）中的表达和纯化
3.4.2 IgA切割试验
3.4.3 IgA切割试验最佳切割时间的确定
3.4.4 IgA切割试验与蛋白的剂量依赖性
3.5 讨论
结论
参考文献
附录
附图
致谢
本文编号：3045098
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3045098.html
