新型犬流感病毒H5N2亚型病原学调查及其HA，NP，NA基因序列分析
发布时间：2021-02-28 17:12
2009年本实验室展光建等人从犬中分离到一株新型H5N2亚型流感病毒，随后宋倩倩等人又通过致病性实验证明该亚型的病毒在犬间进行水平传播，这也进一步警示人们该亚型流感病毒可能会成为潜在的流行毒株。为揭示该亚型病毒在自然犬的流行情况以及其在自然状态下的变异情况，本研究对该亚型流感病毒进行了病原学调查，并采用分子生物学技术对其HA、NA、NP基因进行了序列分析。本研究共采集了96份疑似流感病毒感染的病犬的鼻拭子样品，对样品进行常规处理，接种9-11日龄的鸡胚，进行病毒分离鉴定，成功分离到三株病毒，经血凝试验/血凝抑制试验、RT-PCR以及基因序列分析，这三株病毒均为H5N2亚型流感病毒，分别将这3株H5N2亚型流感病毒命名为A/Canine/Shan Dong/01/2012（H5N2）、A/Canine/Shan Dong/02/2012（H5N2）、A/Canine/Shan Dong/03/2012（H5N2），以上病毒简称为CA/SD/01/12（H5N2）、CA/SD/02/12（H5N2）、CA/SD/03/12（H5N2）。三株病毒的HA蛋白上有许多受体结合位点，这些结合位点上...
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
流感病毒结构图
项目 用量目的基因片段 3.5μlpMD18-T vector 0.5μlSolution Ⅰ 5μl双蒸水 1ul总计 10ul表 5. 重组载体的连接体系Table5. The connection system of recombinant vector图 2.PMD18-T Vector 结果示意图Fig.2 The structure of PMD18-T Vector
Madison. WI）； 再用ClustalX（Version 2.1）对序列进行多序列比对分发生分析则通过PHYLIP （Version 3.69）软件进行，用MEGA4进行编辑系统发最后通过treeview软件绘制最终的系统进化树。果 病原分离鉴定结果011年9月到2012年3月期间，从山东农业大学动物医院以及周围宠物医院采集9症状疑似流感病例的鼻棉拭子的样品，棉拭子样品经过处理之后接种大量SPF鸡每个样品第一次都接种3个鸡胚，每个鸡胚收集到的尿囊液都经过3次以上的传代最后从众多的尿囊液中我们得到了3例血凝效价比较稳定的病毒尿囊液。这些尿毒病毒能在72 h内致死鸡胚，可凝集鸡的红细胞，并能够导致鸡胚大面积的严重血凝及血凝抑制结果见下图
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠感染流感病毒后可抵抗致死性流感病毒攻击的研究[J]. 刘丽琦,李梓,朱云,舒跃龙. 中华实验和临床病毒学杂志. 2012 (06)
[2]LNA探针同时检测人副流感病毒1,2,3型多重荧光定量RT-PCR方法的建立[J]. 姬奕昕,毛乃颖,王焕焕,谢正德,许文波. 中华实验和临床病毒学杂志. 2012 (05)
[3]A型H1N1流感病毒2009年血凝素蛋白变异分析[J]. 武治印,胡劲松. 郑州大学学报(医学版). 2012(05)
[4]H3N2亚型犬流感病毒重组HA1蛋白间接ELISA检测方法的建立[J]. 黄柏槐,张敦伟,远立国,张桂红,李守军. 中国预防兽医学报. 2012(09)
[5]应用中空纤维柱和凝胶色谱纯化鸡胚流感病毒[J]. 杨欣,刘杰,刘瑛,吴永林,范凤鸣,刘辉,张鹏艳,李玉华. 中国生化药物杂志. 2012(04)
[6]流感病毒H3N2神经氨酸酶双点突变对病毒抗药性影响的研究[J]. 董长颖,韩冰孝. 畜牧兽医学报. 2012(08)
[7]大流行甲型H1N1流感病毒变异株的小鼠感染实验研究[J]. 刘志辉,姜涛,刘娟,年庆功,秦鄂德,冉多良,秦成峰. 军事医学. 2012(07)
[8]高增殖性能犬流感CIV-PR8重组病毒的制备[J]. 周洁文,滕巧泱,闫丽萍,边延峰,张旭,徐大伟,石迎,周雨霞,李泽君. 中国预防兽医学报. 2012(07)
[9]斑鸠对H9N2亚型禽流感病毒的易感性及其流感病毒受体类型的研究[J]. 丁佩佩,刘月焕,陈明勇,韩春华,林健,韩婧雯,潘洁. 中国农业科学. 2012(12)
[10]天津地区儿童急性呼吸道感染病毒病原检测分析[J]. 王维,林书祥,李胜英,张桦,黄敬孚. 天津医药. 2012(06)
本文编号：3056178
【文章来源】：山东农业大学山东省
【文章页数】：72 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
流感病毒结构图
项目 用量目的基因片段 3.5μlpMD18-T vector 0.5μlSolution Ⅰ 5μl双蒸水 1ul总计 10ul表 5. 重组载体的连接体系Table5. The connection system of recombinant vector图 2.PMD18-T Vector 结果示意图Fig.2 The structure of PMD18-T Vector
Madison. WI）； 再用ClustalX（Version 2.1）对序列进行多序列比对分发生分析则通过PHYLIP （Version 3.69）软件进行，用MEGA4进行编辑系统发最后通过treeview软件绘制最终的系统进化树。果 病原分离鉴定结果011年9月到2012年3月期间，从山东农业大学动物医院以及周围宠物医院采集9症状疑似流感病例的鼻棉拭子的样品，棉拭子样品经过处理之后接种大量SPF鸡每个样品第一次都接种3个鸡胚，每个鸡胚收集到的尿囊液都经过3次以上的传代最后从众多的尿囊液中我们得到了3例血凝效价比较稳定的病毒尿囊液。这些尿毒病毒能在72 h内致死鸡胚，可凝集鸡的红细胞，并能够导致鸡胚大面积的严重血凝及血凝抑制结果见下图
【参考文献】：
期刊论文
[1]小鼠感染流感病毒后可抵抗致死性流感病毒攻击的研究[J]. 刘丽琦,李梓,朱云,舒跃龙. 中华实验和临床病毒学杂志. 2012 (06)
[2]LNA探针同时检测人副流感病毒1,2,3型多重荧光定量RT-PCR方法的建立[J]. 姬奕昕,毛乃颖,王焕焕,谢正德,许文波. 中华实验和临床病毒学杂志. 2012 (05)
[3]A型H1N1流感病毒2009年血凝素蛋白变异分析[J]. 武治印,胡劲松. 郑州大学学报(医学版). 2012(05)
[4]H3N2亚型犬流感病毒重组HA1蛋白间接ELISA检测方法的建立[J]. 黄柏槐,张敦伟,远立国,张桂红,李守军. 中国预防兽医学报. 2012(09)
[5]应用中空纤维柱和凝胶色谱纯化鸡胚流感病毒[J]. 杨欣,刘杰,刘瑛,吴永林,范凤鸣,刘辉,张鹏艳,李玉华. 中国生化药物杂志. 2012(04)
[6]流感病毒H3N2神经氨酸酶双点突变对病毒抗药性影响的研究[J]. 董长颖,韩冰孝. 畜牧兽医学报. 2012(08)
[7]大流行甲型H1N1流感病毒变异株的小鼠感染实验研究[J]. 刘志辉,姜涛,刘娟,年庆功,秦鄂德,冉多良,秦成峰. 军事医学. 2012(07)
[8]高增殖性能犬流感CIV-PR8重组病毒的制备[J]. 周洁文,滕巧泱,闫丽萍,边延峰,张旭,徐大伟,石迎,周雨霞,李泽君. 中国预防兽医学报. 2012(07)
[9]斑鸠对H9N2亚型禽流感病毒的易感性及其流感病毒受体类型的研究[J]. 丁佩佩,刘月焕,陈明勇,韩春华,林健,韩婧雯,潘洁. 中国农业科学. 2012(12)
[10]天津地区儿童急性呼吸道感染病毒病原检测分析[J]. 王维,林书祥,李胜英,张桦,黄敬孚. 天津医药. 2012(06)
本文编号：3056178
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