新发鸭生长迟缓病毒ELISA抗体检测方法的建立及传代致弱研究
发布时间：2021-03-02 05:15
鸭生长迟缓疫病是近年来我国新出现的传染性疾病,以发病鸭精神萎靡、生长发育迟缓为主要特征。该病主要发生在樱桃谷肉鸭,发病日龄集中在1025日龄,少数鸭群于514日龄也有发病。该病一年四季均可发生,整体的发病率在15%以下。早期从发病鸭体内分离到一株未知RNA病毒,病毒粒子直径在70100nm之间,有囊膜,命名为鸭生长迟缓病毒（Anhui2株）。该病毒人工感染不致死鸭子,但可在鸭群之间进行水平传播,引起鸭子生长缓慢,残次率增高。本研究以鸭生长迟缓病毒Anhui2毒株作为免疫抗原,分3次免疫6周龄的BALB/c小鼠,小鼠血清的抗体效价可以达到1:10000以上,将效价最高小鼠加强免疫后,取其脾细胞与SP2/0细胞进行融合,获得抗Anhui2毒株的杂交瘤细胞。经过间接ELISA的筛选和3次连续的亚克隆,得到2株能稳定分泌抗Anhui2株的杂交瘤细胞株,分别命名为1-5和3-6G。通过效价的测定,两株单抗的细胞上清效价均为1:1000,腹水效价分别为1:10000和1:1000。经中和实验测定,2株杂交瘤细胞均具有中和活性,并且特...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Anhui2病毒粒子电子显微镜图片
图 2.2 免疫小鼠血清抗体效价Fig.2.2 The antibody titers of BALB/c mouse immunized with Anhui2胞的筛选胞置于培养箱中培养，随着时间的延长，未成功融合的细胞就会渐渐观察到很多的细胞碎片。而成功融合的细胞状态会越来越好，形成细液后，用建立的 ELISA 方法进行阳性细胞的筛选，本实验经过 3 次连能稳定分泌抗 Anhui2 病毒株的杂交瘤细胞，分别命名为 1-5 和 3-6G单克隆抗体的制备胞在 BALB/c 小鼠腹腔培养一周后，可以明显的看到小鼠腹部开始胀无菌针头在超净台里收集腹水。第一次收集腹水时，不可收集太多（致小鼠死亡），每只小鼠可收集 5mL 左右，收集的腹水在 4℃条件下去细胞沉淀和油脂，取上清，放入-80℃备用。
图 2.3 分泌 1-5 和 3-6G 抗体杂交瘤细胞的稳定性Fig.2.3 The stability of the hybridoma cells to produce antibodies 1-5 and 3-6G原的纯化一步就是进行小鼠的免疫，而免疫的前提就是获得纯化的抗原。小鼠的免疫效价也越高。这样也越容易获得分泌相应抗体的杂交会减轻。因此获得高纯度的抗原就是成功制备单克隆抗体的前提的性质不稳定、来源有限、及不易提纯，往往使用的是初步提纯了后续的工作量。本实验中的免疫原是参考实验室师兄摸索出来到的 Anhui2 株病毒接种于 10 日龄的 SPF 鸡胚并用梯度浓度的蔗
本文编号：3058679
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：55 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Anhui2病毒粒子电子显微镜图片
图 2.2 免疫小鼠血清抗体效价Fig.2.2 The antibody titers of BALB/c mouse immunized with Anhui2胞的筛选胞置于培养箱中培养，随着时间的延长，未成功融合的细胞就会渐渐观察到很多的细胞碎片。而成功融合的细胞状态会越来越好，形成细液后，用建立的 ELISA 方法进行阳性细胞的筛选，本实验经过 3 次连能稳定分泌抗 Anhui2 病毒株的杂交瘤细胞，分别命名为 1-5 和 3-6G单克隆抗体的制备胞在 BALB/c 小鼠腹腔培养一周后，可以明显的看到小鼠腹部开始胀无菌针头在超净台里收集腹水。第一次收集腹水时，不可收集太多（致小鼠死亡），每只小鼠可收集 5mL 左右，收集的腹水在 4℃条件下去细胞沉淀和油脂，取上清，放入-80℃备用。
图 2.3 分泌 1-5 和 3-6G 抗体杂交瘤细胞的稳定性Fig.2.3 The stability of the hybridoma cells to produce antibodies 1-5 and 3-6G原的纯化一步就是进行小鼠的免疫，而免疫的前提就是获得纯化的抗原。小鼠的免疫效价也越高。这样也越容易获得分泌相应抗体的杂交会减轻。因此获得高纯度的抗原就是成功制备单克隆抗体的前提的性质不稳定、来源有限、及不易提纯，往往使用的是初步提纯了后续的工作量。本实验中的免疫原是参考实验室师兄摸索出来到的 Anhui2 株病毒接种于 10 日龄的 SPF 鸡胚并用梯度浓度的蔗
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