犬瘟热ELISA检测方法的建立及临床应用

发布时间：2021-03-08 20:39

　　犬瘟热（CD）是由犬瘟热病毒（CDV）引起的犬科、鼬鼠科及部分浣熊科的一种急性、高度接触性、致死性传染病。该病在全世界范围内普遍发生,我国是该病的多发地区。近年来,报道显示CDV的感染宿主范围不断扩大,部分地区还出现了非典型症状的病例。虽然该病已有疫苗在使用,但并不能阻止该病在一些地区的爆发趋势。因此,快速而有效的检测方法是防控该病的关键。酶联免疫吸附试验（ELISA）作为一种特异性强、敏感度高、操作简便的检测技术,在CDV的检测上,有着很好的应用前景。本研究在实验室已有的研究基础上,建立了基于单克隆抗体的夹心ELISA检测方法和基于杆状病毒表达的重组CDVN蛋白的间接ELISA检测方法,以用于CDV抗原和抗体的检测。试验内容包括：实验1：犬瘟热病毒单克隆抗体夹心ELISA检测方法的建立及临床应用本实验建立了检测犬瘟热病毒的单克隆抗体夹心ELISA方法：以纯化的犬瘟热病毒（CDV）单抗1D9作为捕获抗体,以辣根过氧化物酶（HRP）标记的单抗1E7作为检测抗体,反应条件为：捕获抗体的包被浓度为2.4μg/mL,酶标单抗1E7的稀释度为1：4000,封闭液采用10%小牛血清。特异性试验结果... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：57 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一篇 文献综述 犬癌热病毒检测技术研究进展
    1 犬瘟热病原特性
    2 犬瘟热病毒检测技术
        2.1 病原学检测方法
        2.2 血清学检测方法
        2.3 分子生物学检测方法
    参考文献
第二篇 试验研究
    第一章 犬瘟热病毒单克隆抗体夹心ELISA检测方法的建立及临床应用
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 病毒和细胞
            1.2 主要试剂
            1.3 包被单抗和酶标单抗的制备
            1.4 单抗夹心ELISA方法最佳工作条件的确定
            1.5 单抗夹心ELISA阳性临界值的确定
            1.6 特异性试验
            1.7 敏感性试验
            1.8 重复性试验
            1.9 对临床样品的检测
        2 结果
            2.1 单抗夹心ELISA方法最佳工作条件的确定
            2.2 单抗夹心ELISA检测方法操作程序的确定
            2.3 单抗夹心ELISA阳性临界值的确定
            2.4 特异性试验
            2.5 敏感性试验
            2.6 重复性试验
            2.7 对临床样品的检测
        3 讨论
        Abstract
        参考文献
    第二章 犬瘟热病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及临床应用
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 病毒、血清和细胞
            1.2 主要试剂
            1.3 抗原的制备
            1.4 间接ELISA检测方法最佳工作条件的确定
            1.5 间接ELISA检测方法结果的判定
            1.6 敏感性试验
            1.7 稳定性试验
            1.8 对临床样品的检测
        2 结果
            2.1 抗原的制备
            2.2 间接ELISA检测方法最佳工作条件的确定
            2.3 间接ELISA检测方法操作程序的确定
            2.4 间接ELISA检测方法结果的判定
            2.5 敏感性试验
            2.6 重复性试验
            2.7 对临床样品的检测
        3 讨论
        Abstract
        参考文献
全文总结
附录：常用试剂的配制
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]同时检测犬瘟热病毒、犬细小病毒、Ⅰ型和Ⅱ型犬腺病毒多重PCR方法的建立[J]. 刘大飞,姜一曈,戚亭,程景,刘立奎,林文君,柴洪亮,杨天阔,王翀,华育平,曲连东,张洪英.  中国预防兽医学报. 2012(11)
[2]犬瘟热病毒野毒株与疫苗株鉴别检测RT-LAMP方法的建立[J]. 杨天阔,刘大飞,姜骞,张洪英,曲连东.  中国预防兽医学报. 2012(06)
[3]犬瘟热病毒RT-PCR检测方法的建立[J]. 郭玲,万莉,马磊,张琦,谢志勇,杨映,舒蕾,陈世界,杨晓农,颜其贵.  中国兽医科学. 2012(02)
[4]荧光定量RT-PCR法对犬瘟热病毒PS株感染犬血清和粪便中病毒的检测[J]. 许红丽,易立,王建科,杨莘,程世鹏.  中国预防兽医学报. 2012(01)
[5]犬瘟热病毒单抗夹心ELISA检测方法的建立[J]. 张鸿,胡传莉,贺生中,李玲,朱善元,翟晓虎.  扬州大学学报(农业与生命科学版). 2011(04)
[6]非典型犬瘟热病毒核衣壳蛋白基因序列分析及其在大肠杆菌中的表达[J]. 毕振威,王永山,范红结,王智群,吴晓悠,马金荣,欧阳伟,张海彬.  中国预防兽医学报. 2011(08)
[7]胶体金免疫层析技术在动物疾病诊断中的应用进展[J]. 李志源,张建斌,杨百亮.  天津农学院学报. 2011(01)
[8]犬瘟热病毒反转录环介导等温扩增诊断方法的建立[J]. 刘彩玉,王吉贵,袁道莉,王爽,朱新产,刘维全.  中国兽医科学. 2010(04)
[9]犬瘟热病毒（CDV）ELISA检测方法的建立与应用[J]. 王吉,卫礼,付瑞,巩薇,岳秉飞,贺争鸣.  中国比较医学杂志. 2009(04)
[10]犬瘟热病毒核蛋白基因的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立[J]. 袁宝,王琛,任文陟,张嘉保,赵志辉.  中国兽医学报. 2008(07)

硕士论文
[1]犬常见病毒病诊断基因芯片的研究与应用[D]. 张伟.山东农业大学 2006



本文编号：3071639