慢病毒介导稳定表达SLAM/V的转基因细胞系的建立

发布时间：2021-03-15 23:46

　　小反刍兽疫（PPR）又称山羊瘟、口腔炎-肺炎综合征等,是家养和野生小反刍动物的重要传染性病毒疾病,其病原是副粘病毒科,麻疹病毒属的小反刍兽疫病毒（PPRV）。目前,该病依然呈现不断蔓延之势,造成了巨大的经济损失。信号转导淋巴细胞激活分子（SLAM）是PPRV感染宿主的主要天然受体,PPRV通过其血凝素蛋白（H）与宿主SLAM受体结合,使病毒附着并侵入宿主细胞,将SLAM蛋白导入细胞中稳定表达可以提高细胞对PPRV的敏感性。有研究表明,SLAM受体N端V结构域通过与H蛋白结合启动麻疹病毒的入侵感染,PPRV与麻疹病毒同属于麻疹病毒科。本研究利用慢病毒表达系统建立稳定表达山羊SLAM/V的Vero细胞系,提高细胞对PPRV的敏感性用于PPRV田间毒的分离。本文研究工作如下:1.采用山羊外周血淋巴细胞的总RNA以RT-PCR方法获得SLAM/V基因,将其插入原核表达载体pGEX-6P-1,并成功表达出包含SLAM/V蛋白与GST标签的融合蛋白,其分子质量约为39 kDa,主要以包涵体形式存在。Western-blot试验证实,纯化后的融合蛋白与山羊抗人SLAM多克隆抗体具有良好的反应活性。2... 

【文章来源】：甘肃农业大学甘肃省

【文章页数】：83 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

015年世界PPR流行分布图

SLAMF在细胞表面的结构

重组质粒pMD18-T/SLAM/V的PCR鉴定Fig.1IdentificationofpMD18-T/SLAM/VbyPCR

【参考文献】：
期刊论文
[1]稳定表达山羊SLAM受体的Vero细胞系的建立[J]. 高华峰,赵文华,严欢,杨仕标.  中国畜牧兽医. 2016(08)
[2]一株小反刍兽疫病毒的分离鉴定与生长曲线测定[J]. 张永强,吴晓东,邹艳丽,包静月,王筱真,王志亮.  中国动物检疫. 2015(10)
[3]稳定表达山羊SLAM受体的BHK-21细胞系的建立及应用[J]. 张家林,李翠翠,谢梅梅,王子龙,陈伟业,步志高.  中国预防兽医学报. 2015(07)
[4]慢病毒载体及其研究进展[J]. 孟凡荣,陈琛,万海粟,周清华.  中国肺癌杂志. 2014(12)
[5]基于山羊痘病毒P32蛋白ELISA检测方法的建立[J]. 吴锦艳,田宏,陈妍,尚佑军,宋江伟,刘湘涛.  中国兽医学报. 2014(12)
[6]水貂犬瘟热病毒受体SLAM的原核表达[J]. 王聪,张洪亮,黄娟,靳继惠,王怡男,单虎.  动物医学进展. 2013(02)
[7]犬SLAM基因真核表达载体的构建及在MDCK细胞中的稳定表达[J]. 褚秀玲,苏建青,江成,张吉清,马秀亮.  湖北农业科学. 2012(22)
[8]稳定表达犬信号淋巴细胞激活因子基因细胞株的建立与鉴定[J]. 苏建青,褚秀玲,马秀亮,江成,张吉清.  安徽农业科学. 2012(14)
[9]狐、貉和水貂犬瘟热病毒受体SLAM的基因克隆及其真核表达[J]. 赵建军,张海玲,高晗,赵春霏,柴秀丽,陈涛,闫喜军,吴威.  兽类学报. 2010(01)
[10]小反刍兽疫病毒F基因真核载体的构建与表达[J]. 朱学亮,张强,杨帆,窦永喜,骆学农,岳城,才学鹏.  中国兽医科学. 2009(05)

博士论文
[1]麻疹病毒通过受体SLAM对昆虫细胞的感染及其诱发细胞凋亡的机制研究[D]. 刘鑫.武汉大学 2005

硕士论文
[1]小反刍兽疫病毒囊膜糖蛋白和受体的相互作用研究[D]. 邓瑞雪.甘肃农业大学 2016
[2]一起小反刍兽疫的诊断及病原分离鉴定[D]. 王春霞.吉林大学 2015



本文编号：3085027